25 Kasım 2017,Cumartesi
Anasayfa » Tag Archives: sonra

Tag Archives: sonra

Half Life seneler sonra güncellendi

'un 19 sene önce piyasaya sürdüğü ve FPS oyunlarının atası olarak safla sayılan Half-Life Kasım 1998 'den bu yana ilk defa güncellendi. Counter-Strike gibi oyunların da çıkışına sebep olan Half-Life 'in yeni güncellemesi, 19 senelik oyun günümüze göre optimize ediyor. Hata Raporu "olarak gönderilen raporlara göre hazırlandı. İşte seneler sonra gelen Half-Life güncellemesi! – Half-Life'ın konsol sorunu düzeltildi. – Özel …

Devamını Oku »

Arka plan Bebe pedi idrar örneklerinin ilave tanı amaçlı programı Ve kirletilen oran bilinmemektedir. Amaç İdrar yolu enfeksiyonu (İYE) tanısı için bir klinik öngörme kuralı geliştirmek, Ped metodu Tasarım ve ayar 233 İngiltere'de birincil bakım alanlarına <5 yıl hapseten, tedirgin şekilde hasta çocuklar Yöntem İSİ ile semptomların, işaretlerin ve idrar ölçüm çubuğunun test sonuçlarının bağımsız bağlantılarını tanımlamak için lojistik regresyon; Diyagnostik programı, alıcı operatör eğrileri altında alan olarak nicelendirilir (AUROC). Sonuçlar Bebe pedi örnekleri 3205 çocuktan (% 82 yaşlı) elde edildi. <2 yıl;% 48 kadın), kültür sonuçları 2277 (% 71.0) için mevcuttu ve 30 (% 1.3) kültür üzerinde bir İYE vardı. AUROC değeri 0,81 (temiz bulmada 0.87) olan 0.87 (temiz temizlik için 0,90) olan iç doğrulama katsayısı modeli ile kadınlarda seks, kötü kokan idrar, koyu renkli idrar ve bez döküntüsü bulunmaması, ĐYE ile bağımsız olarak ilişkiliydi. Catch), dipstick sonuçları eklenerek. GP'lerin "tanı koyma" AUROC 0.63 (% 95 güven aralıkları [CI] = 0.53 – 0.72) idi. Nappy pad'inin toplam% 12.2'si ve temiz yakalama örneklerinin% 1.8'i 'açıkça kontamine' (risk oranı 6.66,% 95 GA = 4.95 ila 8.96; P <0.001) Sonuç Nappy pad idrar kültürü sonuçları, ebeveynler ve ölçüm çubuğu testleri tarafından rapor edilebilen özellikler ile klinik olarak yararlı olabilir, ancak temiz yakalamayla karşılaştırıldığında daha az doğrudur ve daha sık kontamine olurlar İdrar kültürü Anahtar kelimeler: antibakteriyel ajanlar, tanı, bebek, çocuk hastalıkları, birinci basamak sağlık hizmetleri, idrar yolu enfeksiyonları GİRİŞ Birinci basamak sağlık hizmetlerine başvuran çocukların% 80'inde idrar yolu enfeksiyonu (İYE) kaçırılabilir. 2 İYE'nin doğru teşhisi, antibiyotiklerle aşırı veya düşük tedaviden kaçınmak ve külfetli Pahalı araştırmalar. 3 Bu, tuvalet eğitimli olmayan ve özellikle spesifik olmayan semptomlarla başvuran, ĐY'yi araştırmak için hangi çocuğun araştırılması konusunda karar vermeyi öngören, daha genç, sözlü öncesi çocuklarda önemlidir. 3 Bir idrar örneğinin elde edilmesi, çoğu çocuğun ilk bulunduğu birincil bakımda zaman alıcı ve özellikle zorlayıcı olabilir. 4 Bebeklerdeki küçük bebek bezleri (bezler), 3 İdrar numunesinin basit, güvenilir ve kabul edilebilir olması gerekir ve ebeveynler bez bezlerini kolaylıkla bulurlar. 5 Günlük bebek bezi örneği, gündelik bakımda 1 ve bez bezi idrar koleksiyonunu kullanarak üzerinde raporlar hazırlıyor. Bebeğin% 40'ı. 3 5 Bununla birlikte, klinik yarar Idrar örneğinin bez bezi yönteminden elde edilen bilgiler net değildir, bulaşma oranları diğer örnekleme yöntemlerinden daha yüksek olabilir ve bezlerdeki çocuklar semptomları daha iyi tanımlayabilen ve temiz yakalama örneklemesi daha kolay yaşça büyük çocuklara farklılık göstermektedirler . Suprapubik aspirasyon veya kateterizasyon gibi daha invazif yöntemlerle idrar örnekleri almak, birincil bakım ayarlarının çoğunda uygulanabilir ya da kabul edilebilir değildir. Nasıl bu Birinci basamakta başvuran küçük çocuklarda üriner sistem enfeksiyonlarının (ÜİE) yokluğu. Aşırı veya eksik muamele ve soruşturmayı önlemek için zamanında ve doğru tanı gereklidir. Bu özellikle, tuvalet eğitimini almayan ve belirgin olmayan semptomlarla kendini gösteren ön sözlü çocuklarda zordur. GP'ler kullanıyor ve ebeveynler, hala bebek bezlerinden olan çocuklardan idrar toplamak için bez pedleri tercih ediyor ancak bez bezi örneklerinden türetilen verilerin klinik kullanımı, test çubuk testinin katma değeri ve kontamine numunelerin oranı bilinmemektedir. Bebeğin pedlerinden elde edilen idrarla elde edilen kültür sonuçlarının ebeveynler tarafından bildirilebilen özelliklerle birlikte, üriner inkontinans hastalığına yakalanmış ilköğretim okulunda görev yapan, akut olarak iyi durumda olmayan, okul öncesi çocukların belirlenmesinde klinik olarak yararlı olabileceği ancak Temiz yakalama örneklemesi. Bununla birlikte, kontaminasyon oranları bez pedlerinde temiz yakalama numunelerine göre yaklaşık yedi kat daha fazladır. Birinci basamak sağlık hizmetlerinde çocuklarda temiz tutulan idrar örneklemesi, bu nedenle bez bezi yöntemine göre önceliklendirilmelidir, ancak eğer bebek bezi örneği bez bezleri kullanılarak yapılırsa, test bezi testi ilavesi, tanısal doğruluğu önemli ölçüde geliştirir. Bu çalışmanın amacı, bu nedenle, doku ped yöntemini kullanarak örnekleme dayalı İYE tanısı için bir klinik öngörme kuralı geliştirmek ve "temiz yakalama" idrarı örneklerine dayalı benzer bir kuralla tanı yardımcı programını karşılaştırmaktı. 7 Buna ek olarak, bir bez örneği alınmasından sonra dip çubuğu testinin eklenen tanısal değeri tahmin edildi ve kontaminasyon oranları örnekleme yöntemi ile karşılaştırıldı. YÖNTEM

Devamını Oku »

Perivasküler kök hücreler (PSC), mezenşimal kök hücrelerin (MSC'lerin) doğal atalarıdır ve [1945900] Kök hücreler homeostazdan sorumludur ve in vivo onarımı. Prospektif olarak tanımlanmış ve izole edilmiş PSC'lerin plastisite ve osteojenik potansiyeli arttığını göstermiştir. İnfrapatellar yağ yastığından (IFP) gelen hücreler, subkütan yağla karşılaştırıldığında artmış kondrojenik potansiyel göstermiştir. Bu araştırma, IFP PSC'lerin kondrojenik potansiyelini, IFP ve kemik iliği kaynaklı MSC'lerle karşılaştırdı. İmmünhistokimya, endotelyal belirteçler (CD31, CD34, CD34, nevral / glial antijen 2 [NG2]trombosit kökenli büyüme faktörü reseptör-β [PDGFRβ] ve α-düz kas aktini [α‐SMA]) perivasküler belirteçlerinin yerini göstermiştir , CD144, von Willebrand faktörü [vWF]). Stomatolojik vasküler fraksiyondan perisit ve adventisyel hücreler izole edildi (sırasıyla% 3.8 ve% 21.2), canlı sitometri kullanılarak% 88 canlılık elde edildi. İzole edilen perisit ve adventisyal hücrelerin ortalama sayısı sırasıyla 7.9 ± 4.4 x 10 3'e eşit olan 4.6 ± 2.2 x 10 4 ve 16.2 ± 3.2 x 10 4 ve hasat edilen doku gramı başına 20.8 ± 4.3 x 10 3 hücre. Flüoresanla aktive hücre ayırma kültürlenmiş PSC'lerin CD44 + CD90 + CD105 +; Polimeraz zincir reaksiyonu ve immünositokimya, perisitlerin CD146 + fenotipini koruduğunu ve perisit belirteçleri PDGFRβ ve NG2'yi ifade ettiğini gösterdi. Farklılaşma, histokimyasal boyalar ve genetik ifade kullanılarak teyit edildi. Bir pellet modeli kullanan IFP PSC'leri ve MSC'ler, kemik iliği MSC'lerinden çok daha fazla hücre dışı matris oluşturdu (sırasıyla p <.001 ve p = .011). IFP PSC'leri IFP MSC'lerden çok daha fazla hücre dışı matris oluşturdu ( p = .002). Mikrokrom kültürü, farklılaşmış PSC'lerin 4.8 ± 1.3, 4.3 ± 0.9 ve 7.0 faktörlerine göre COL2A1 ACAN ve SOX9 ekspresyonu için MSC'lerle karşılaştırıldığında yukarı doğru düzenlendiğini ortaya koymuştur ± 1.7 idi. IFP, kemik iliği ile karşılaştırıldığında kondrojenik kök hücrelerin önemli ölçüde daha iyi bir kaynağıydı. PSC'ler kültürden türetilmiş MSC'lere göre çok daha fazla hücre dışı matriks oluşturdu. S tem C ells T ranselasyonel M edicine 2017; 6: 77-87 Anahtar kelimeler: Perisit, CD34 +, Kondrojenez, Yetişkin kök hücreleri, Adipoz Giriş Perivasküler kök hücreler (PSC), kültür kökenli mezenşimal kök hücrelerin (MSC'ler) doğal ataları olarak tanımlanmıştır ve in vivo homeostazdan ve rejenerasyondan sorumludur . PSC'ler, tipik olarak kılcal damarlar, venüller ve arterioller gibi daha küçük damarların etrafında bulunan perisitleri ve daha geniş damarların ve damarların çevresinde bulunan adventisyel hücreleri içerir . Adventisyal hücrelerin perisit oluşturabileceği gösterilmiştir; Bu hücre popülasyonlarından herhangi biri kültür içine yerleştirildiğinde yaygın olarak MSC olarak adlandırılanlardan belirgin olmayan hücre popülasyonlarına yol açarlar PSC'ler osteojenik, kondrojenik, adipojenik ve miyojenik Potansiyel, ancak bu sadece osteojenez için nicelendirilmiştir 4 5 6 . Periksit benzeri öncüllerin MSC'ler 2 7 ile karşılaştırıldığında daha iyi olgunlaşmamış ve engraftment potansiyeli olan daha plastik olduğunu gösterdiler, daha iyi olacağını önermekte Doku yenilenmesi ve mühendisliği için kök hücre kaynağı. Kondrojenez Farrington-Rock ve ark. Tarafından gösterilmiştir. Sığır retinal perisitleri kullanılarak 1 3 8 . İnsanlarda, perisitlerin kondrojenik potansiyelinin gösterilmesi pelet kültürlerinde Alc mavi boyama ile sınırlandırılmıştır 1 3 ; Perisitlerin kondrojenik potansiyelini kültürden türetilmiş MSC'lerinkine kıyaslayan veya karşılaştıran herhangi bir veri yoktur. Kondroprojenitor hücrelerin in vivo yerleşimi hala tartışılmıştır; bazıları eklem içindeki dokulardan ve diğerlerinin içinden geldiğine inanmaktadır. Subkondral kemikten geldiğini savunarak. İnfrapatellar yağ bandı (IFP) artiküler kıkırdağa bitişik olan (19459007) 9 bir intra-artiküler ancak ekstrasynoviyal yapıdadır (Şekil. CD146 eklem kıkırdağı içindeki kondroprojenitör hücrelerde bulunan bir belirteç olarak bildirilmiştir 10 . Khan ve diğ. IFP'nin doku kesitleri üzerinde 3G5-pozitif perivasküler kök hücreleri belirledi ancak IFP'den kültürlenen hücrelerin yalnızca küçük bir bölümünün bu fenotipi koruduğunu buldu 11 . İnfrapatellar yağın yakınlığı, kondroprojenitör hücrelerin kökeni için bir aday olmasını sağlar. IFP'den türetilen kök hücreler, bu nedenle, kıkırdak rejenerasyonu için daha büyük bir afiniteye sahip olabilir. Infrapatellar yağ pedi konumu ve numuneleri. (A): Eklem kıkırdağına (siyah) infrapatellar yağ pedinin (IFP) ilişkisini gösteren dizin sagital manyetik rezonans görüntüleme taraması. PSC'lere yönelik daha önceki araştırmalar, cilt altı Çünkü bu, seçmeli prosedürler uygulanan hastalardan atık madde olarak kolaylıkla elde edilebilir. Yağ dokusunun yapısı ve içeriği hasat edilen MSC'lerin rejeneratif potansiyeli gibi 12 konumuna 14 bağlı olarak değişir. IFP eşleştirilen hasta örneklerinden alınan subkutanöz abdominal yağ ile karşılaştırıldığında artmış kondrojenik potansiyel göstermiştir 15 . IFP, eklem içerisinden de sinovyal membranı da içine alan hasattan farklıdır. Yazarlar, IFP'nin doku mühendisliğinde kullanılmak üzere PSC'lerin hasat edilmesi için uygun bir kaynak olduğunu gösteren yayınlanmış verilerin farkında değildirler . Bildiğimiz kadarıyla, PSC'lerin kondrojenik potansiyelini MSC'lerinkiyle ölçen ve karşılaştıran herhangi bir veri yoktur. Araştırma tipik olarak diz artroplastisine giren ve genellikle altmış ve yedinci yıllarında olan hastalardaki IFP örneklerini kullandı. Osteoartrit tedavisi gerektiren bu yaşlı hastalardan elde edilen veriler, fokal kıkırdak kusurlarına sahip olanlar için geçerli olmayabilir – bu, kıkırdak rejenerasyon prosedürleri için uygun olan ve tipik olarak üçüncü ve dördüncü on yıllarında olan gruptur Eklem kıkırdak hasarı, Gelişim koşulları, travma ve erken dejenerasyon. Genellikle genç hastalarda görülür ve son aşama artriti gibi benzer seviyelerde ağrı ve morbiditeye neden olabilir . Bu, hastanın, sosyal faaliyetlerde bulunma, egzersiz yapma ve üstlenme kabiliyeti üzerinde önemli bir etkiye sahiptir. Eklem kıkırdak kusurları kendi kendine tamir edilemez ve kritik bir boyuta ulaştıklarında, son aşama artritine dejenere olurlar 17 . Bu sorunların tedavisinde maliyetin sadece ABD'de yılda 40 milyar dolar olduğu tahmin edilmektedir. Kıkırdak tamir cerrahisinin amacı, ağrıyı hafifletmek, eklemin işlevini en üst düzeye çıkarmak ve son aşamada osteoartirit için progresyonu önlemektir. Genç yetişkinlerde bu hayati öneme sahiptir, çünkü kaçınılmaz dejenerasyon şu anda cerrahi eklem replasmanı ile yönetilmektedir, fonksiyonel talepleri yüksek olan ve implantın daha uzun süre dayanması nedeniyle genç hastalarda çirkin bir seçenektir. Bu hastaların ideal tedavisi, hiyalin kıkırdağın yenilenmesi olacaktır. Bu çalışmanın temel amacı, IFP'yi, özellikle kıkırdak rejenerasyonu için doku mühendisliği için PSC'lerin prospektif olarak izole edilmesi için bir kaynak olarak değerlendirmekti. Ek amaçlar, IFP ve kemik iliği arasında ve PSÖ'ler ile IFP'den gelen MSC'ler arasında kondrojenik potansiyel açısından farklılıklar olup olmadığını saptamaktı. Ayrıca, örneklerin artroskopik olarak genç hastalardan hasat edilip edilemediğini ve bu örneklerin artroplasti yaşlı hastalardan farklı olup olmadığını araştırdık, çünkü ortopedik cerrahlar dizindeki kıkırdak rejenerasyonu için kendi numunelerini toplayan doğrudan etkilere sahipti. Doku numunelerinin toplanması, depolanması ve kullanımı, Güney Doğu İskoçya Araştırma Etik Komitesi tarafından onaylandı (19459035). Malzemeler ve Yöntemler Doku Hasat ve Hücre İzolasyonu Referans numarası 10 / S1103 / 45). Total diz replasmanı (TKR; Şekil) veya artroskopik anterior çapraz bağ rekonstrüksiyonu (ACL; Şek.) Bir parçası olarak çıkarılan infrapatellar yağ pedi toplandı ve% 10 fetal sığır ile takviye edilmiş steril Dulbecco Modifiye Kartal Ortamında (DMEM) laboratuara nakledildi. Doku örnekleri, 1 mm'den (19459007) 3 (Şekil.) 'Den az olmamasını sağlamak için mekanik olarak bozuldu ve sindirimle kaplandı (ör., Spermatozis, Orta (% 10 FBS,% 1 PS ve% 1 kollajenaz II takviyeli DMEM [Thermo Fisher Scientific Life Sciences, Waltham, MA, http://www.thermofisher.com]). Numuneler çalkalayıcı bir su banyosunda 37 ° C'de ve 150 rpm'de 40 dakika boyunca sindirildi. Digestler eşit hacimde bir DMEM ile karıştırılmış ve daha sonra 1800 rpm'de 10 dakika boyunca santrifüje tabi tutulmuştur. Adipositler ve yağlı yağ içeren süpernatant aspire edildi ve atıldı. Topaklar, 25 ml% 2 FBS / PBS (5 mM EDTA) içinde yeniden süspanse edildi. Doku süspansiyonları, 200 um'lik bir naylon örgü ve daha sonra 100, 70 ve 40 um'lik hücre süzücüler aracılığıyla birbiri ardına filtrelenmiştir. Gerilmiş süspansiyonlar 1.500 rpm'de 10 dakika boyunca santrifüje tabi tutuldu. Süpernatan aspire edildi ve atıldı ve peletler, PSC'leri izole etmek için akış sitometrisi için yeniden süspande edildi. IFP kültüründen türetilen MSC'lerin elde edilmesi için, bu hücre süspansiyonu bir T75 şişesi içerisinde 10 ml kültür ortamı içine yerleştirildi. Diz replasman ameliyatı geçiren hastaların distal femurundan toplanan kemik iliği, MSC'leri elde etmek için doğrudan bir T75 şişesi içinde 10 ml kültür ortamına yerleştirildi. MSC kültürleri 24 saat içinde değiştirildi ve tüm yapışık hücreler prolifere kalmaya bırakıldı. Histoloji ve İmmünohistokimya Doku numuneleri, 2 cm 3 ,% 4 formalinde hızlı ve tam fiksasyon sağlamak için. Sabit doku Tissue-Tek kasetlerine yerleştirildi (Sakura Finetek, Torrance, CA, Http://www.sakura-americas.com) ve bir Leica ASP işlemci (Leico Biosystems, Nussloch, Almanya, Http://www.leicabiosystems.com) sıralı alkol, ksilen ve parafin mumu adımlarını kullanarak. Doku daha sonra erimiş balmumu içine gömüldü, soğuk bir tabla üzerinde katılaşmaya bırakıldı ve 7 um kalınlıktaki kesitlere kesildi. Kesitler 55 ° C'de gece boyunca kuluçkaya yatırılmış, her iki dakikada 2 dakika boyunca% 95 etanol, 3 kez, daha sonra% 95,% 80 ve% 50 etanol olmak üzere yeniden kıvamlandırılmış (5 dakika için ksilen, 3 kez) Sonra akan su altında yıkanır). Slaytlar bir sonraki paragrafta tarif edildiği gibi boyandıktan sonra dehidre edildi (her biri 30 saniye boyunca% 50,% 80 ve% 95 etanol ve 2 dakika süreyle% 100 etanol, 3 kez) ve ksilen kullanılarak monte edildi. Bölümler, Harris hematoksilen (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Http://www.sigmaaldrich.com) ile 5 dakika süreyle yıkanmış ve akan su altında yıkanmıştır. Etanol içindeki% 1 hidroklorik asit içinde farklılaştılar ve doku kesitleri maviye dönüşene kadar 2 dakika boyunca Scott'un musluk suyu ikamesi çanağına aktarıldı. Slaytlar eozin içinde 2 dakika boyunca kontrast madde ile lekelenmiş ve kısa bir süre akan su altında yıkanmıştır. Picrosirius red (PSR) solüsyonu, doymuş sulu pikrik asit içerisinde sirius red F3B (% 0.1) kullanılarak yapıldı. Kesitler PSR solüsyonuna 2 saat süreyle yerleştirildi, çıkarıldı ve akan suda 30 saniye yıkandı. Tyramide sinyal amplifikasyonu, bir Leica BOND-MAX boyama robotu (Leica Biosystems) kullanılarak yapıldı. Slaytlar başlangıçta hidrojen peroksidaz (BOND yıkamada 1:10, [BW] ile 10 dakika bloke edildi ve sonra serumda 10 dakika süreyle bloke edildi (tipli ikincil antikor konakçı türe bağımlı). Kesitler birincil antikor ile 30 dakika boyunca boyandı (CD31 [catalog no. ab28364]CD34 [catalog no. ab8536]CD146 [catalog no. ab134065]hepsi Abcam, Cambridge, MA, http://www.abcam.com; Nöral / glial antigen 2 [NG2; catalog no. 554275]BD, Franklin Lakes, NJ, http://www.bd.com; Von Willebrand faktörü [vWF; catalog no. V2700‐01C]US Biological, Salem, MA, Https://www.usbio.net) ve 30 dakika boyunca sekonder bir horseradish peroksidaz (serumda 1: 50 seyreltme, keçi anti-tavşan [catalog no. ab7171; Abcam] ve keçi anti-fare [catalog no. ab6823; Abcam]) izledi. Tyramide amplifikasyonu, gerekli antikor sayısına (katalog no. NEL741B001KT, NEL744B001KT ve NEL745B001KT'ye) bağlı olarak fluorescein izotiosiyanat (FITC), siyanin (Cy) 3 ve Cy5 tiramid kitleri kullanılarak 10 dakika boyunca (kendi seyrelticisinde 1:50) gerçekleştirildi Sırasıyla Perkin Elmer, Waltham, MA, 10 dakika (BW'de 1: 1,000) boyanarak 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) boyanmıştır. Histokimyasal boyama bir parlak alanı kullanarak görüntülendi (http://www.perkinelmer.com) Ayarı ve bir Zeiss Gözlemci mikroskoplu renkli kamera (Zeiss International, Jena, Almanya, http://www.zeiss.com). Olympus BX61 floresan mikroskopu (Olympus, Tokyo, Japonya, Http://www.olympus-global.com), immünohistokimya için kullanılan tek tek fluoroforlardan gelen emisyonu sıralı olarak kaydetmek için kullanıldı; Bunlar daha sonra birleşik bir görüntü oluşturmak üzere birleştirildi. İzotipleri kullanan kontroller aynı koşullar altında görüntülendi. Akış Sitometrisi PBS içinde% 10 fare serumu içinde hücreler bloke edildi ve oda sıcaklığında (RT) 20 ° C'de bırakıldı (20 ° C) Analiz için dakika-100 μl ve hücre ayırma için 500 μl. Aksi belirtilmedikçe karanlıkta hücre süspansiyonuna 1: 100 oranında bir seyreltme ile antikorlar eklenmiştir. CD31-PE (BD340297), CD34-FITC (BD555821), CD45-PE-Cy7 (BD557748) ve CD146-AF647 (BD562230) olmak üzere BD'den aşağıdaki antikorlar hücre ayrıştırması için kullanılmıştır. Kültürlenmiş hücrelerin değerlendirilmesinde kullanılan ek antikorlar arasında CD34-PE (katalog No. R1725; Agilent Technologies; Santa Clara, CA, http://www.agilent.com); Ve BD: CD44-AF700 (BD561289), CD56-PE-Cy7 (BD560916), CD90-FITC (BD555595), CD105-PE-Cf594 (BD562380) ve CD144-PerCP-Cy5.5 (BD561566). Hücreler karanlıkta buz üzerinde 20 dakika inkübe edildi. Hücreler, 2 ml PBS içerisinde yıkandı ve 5 dakika için 1,000 rpm'de santrifüje tabi tutuldu. Süpernatan aspire edildi ve atıldı ve pellet, analiz için 300 ul ve hücre çeşitleri için 500 ul ile birlikte% 2 FBS / PBS içinde yeniden süspansiyon haline getirildi. Her bir antikor için bir kompenzasyon tüpü, tekli 70 μl% 2 FBS / PBS ile seyreltilmiş pozitif telafi boncuklarının damlası ve hücrelere özdeş bir şekilde boyandı. Bunlar, 270 ul'lik nihai bir hacimde yeniden askıya alındı ​​ve bir damla negatif kontrol boncukları, floresanla aktive edilmiş hücre ayırma (FACS) analizi veya sınıflandırmadan hemen önce eklendi. Geçitler, gerçek-pozitif boyanmayı belirlemek için negatif kontroller kullanılarak belirlendi. Hücre Kültürü FACS'ye göre sıralanmış hücreler, 300 | il endotel hücresi büyüme ortamı ( EGM-2; Lonza, Basel, İsviçre, Percyitler (CD31-CD34-CD45-CD146 +) ve adventisyal hücreler (CD31-CD34 + CD45-CD146-) olarak adlandırılmıştır. Kuyulara ve şişelere% 0.2 (hacim başına ağırlık) jelatin (EMD Millipore, Billerica, MA, Http://www.emdmillipore.com) 10 dakika boyunca 4 ° C'de inkübe edin. Hücreler, EGM-2'de cm başına 4 cm 2 yoğunluğunda kaplandı ve 37 ° C,% 5 CO 2 'de kültürlendi. EGM-2 aracığı, hücreler% 90-100'lük konfluansa ulaşana kadar 7 gün sonra ve daha sonra her 4 günde değiştirildi. Geçiş 1'den itibaren tüm hücreler, DMEM /% 20 FBS /% 1 PS içinde kültürlendi. Hücreler PBS içinde iki kez yıkandı ve daha sonra hücrelerin>% 90'ı mobil hale getirilene kadar 3-5 dakika 37 ° C,% 5 CO 2'de % 0.05 tripsin-EDTA içinde inkübe edildi. Komple ortam plakaya veya şişeye ilave edildi ve hücre süspansiyonu 15 ml'lik bir santrifüj tüpüne aktarıldı. Hücreler, 5 dakika boyunca 1.000 rpm'de santrifüjle topaklaştırıldı. Süpernatan aspire edildi ve atıldı ve pellet daha fazla kültür genişletme, farklılaşma veya akış sitometrisi için yeniden askıya alındı. Mezenkimal Farklılaşma Tek katman farklılaşması, 20 oyuk kullanılarak yapıldı 24 oyuklu bir plakadan: 10 göz, büyütme ortamı (DMEM /% 10 FBS /% 1 PS) için ve 10 farklılaşma ortamı için (HyClone AdvanceSTEM osteojenik ve adipojenik ortam; GE Healthcare Biosciences, Pittsburgh, PA, http://www.gelifesciences.com). Her bir 10 kuyucuk kümesi, ribonükleik asit (RNA) ekstraksiyonu için 5 ve histokimyasal boyama için 5'e bölündü. Hücreler, ml başına 2 x 10 4 konsantrasyona kadar seyreltildi ve her göze 1 ml ilave edildi. Plakalar,% 50-70 konfluent olana kadar 37 ° C,% 5 CO 2 de inkübe edildi, bu noktada farklılaşma seyrinin 0 inci günde olduğu kabul edildi. Plakalar kontroller olarak 0 günde alınmıştır. Ortam, farklılaşmaya giren plakalardan çıkarıldı ve 1 mi büyüme (DMEM /% 10 FBS /% 1 PS) veya farklılaşma ortamı ile değiştirildi. Ortam, haftada iki kez 21 gün boyunca değiştirildi. Üç boyutlu pelet kültürü kondrojenik farklılaşma için kullanıldı. Hücre sayımı yaptıktan sonra, hücreler, ml başına 6 x 10 5 hücre yoğunluğunda, ya kondrojenik ortamda (HyClone AdvanceSTEM; GE Healthcare Biosciences) ya da DMEM /% 10 FBS /% 1 PS'de yeniden süspanse edildi ve 500 Ml, 96 oyuklu bir V taban plakasının bir bireysel oyuğuna pipetle yerleştirildi. Hücreler 800 rpm'de 5 dakika süreyle santrifüje tabi tutulduktan sonra 37 ° C'de% 5 CO 2 inkübe edildi. Büyüme ortamı kontrolleri için altı pelet ve farklılaşma ortamı için altı adet pelet kullanıldı. Altı, üçü RNA ekstraksiyonu için, üçü de histokimyasal boyama için kullanıldı. Ortam plakaları 800 rpm'de 5 dakika santrifüj ederek haftada iki kez değiştirildi ve daha sonra ortam aspire edildi, atıldı ve taze ortam ile değiştirildi. Orta derecede değişiklikler yapıldıktan sonra peletler, yapışkan olmadıklarından emin olmak için hafifçe çalkalandı. Mikrokrom kültürleri Zhu ve ark. 18 . Mikromasterler 5 x 10 5 hücrenin Kafienah ve diğerleri tarafından tarif edilen 30 ul kondrojenik ortam içinde yeniden süspanse edilmesiyle oluşturuldu. 19 . Hücre süspansiyonu, 24 oyuklu bir plakanın tek bir kuyusunun ortasına nazikçe pipetle gönderildi. Hücreler, ilave 1 ml kondrojenik ortam ilave edilmeden önce gece boyunca 37 ° C,% 5 CO 2 kalmıştır. Ortam, 21 günde bir 2-3 günde bir değiştirildi. Histokimya İmmunositokimya için, PBS çıkarıldı ve hücreler% 0.05 Triton-PBS ile permeabilize edildi. Oda sıcaklığında 3 dakika; Hücreler üç kez PBS ile yıkandı ve daha sonra RT'de 1 saat boyunca Protein Bloğu (Agilent Technologies) ile bloke edildi. Hücreler PBS'de yıkandı ve daha sonra birincil antikor ile gece boyunca 4 ° C'de inkübe edildi. Ertesi sabah, çukurlar 5 kez 3 kez yıkandı – bir kez PBS-Tween ve iki kez PBS ile yıkandı. Hücreler, karanlıkta oda sıcaklığında 1 saat boyunca ikincil antikor ile inkübe edildi. Daha üç yıkamadan sonra, lamelleri çıkarıldı ve herhangi bir fazla sıvı çıkarıldı. Lamelleri, DAPI floromount kullanarak slaytlar üzerine monte edildi ve bir yapıştırıcıyla yerine sabitlenmeden önce karanlıkta 1 saat hava kurumasına izin verildi. Beş farklı hastadan kültürlenen perisitler, üç farklı anti-CD146 antikoru (klon OJ79c [catalog no. MCA2141F]BioRad Laboratories, Hercules, CA, http://www.bio-rad.com; Klon 541-10B2 [catalog no. 130‐092‐851]Miltenyi Biotec, San Diego, CA, http://www.miltenyibiotec.com; Klon P1H12 [catalog no. 563186]BD Biosciences). Osteojenik farklılaşma, Alizarin red kullanılarak, kalsiyum birikintileri ile çift difraksiyonlu bir kompleks oluşturmak üzere belirlendi. Alizarin kırmızı çözelti, 100 mL damıtılmış su (dH 2 ) ile 2 g Alizarin kırmızı S (CI 58005) ilave edilerek hazırlandı. Bu iyice karıştırıldı ve pH,% 10 amonyum hidroksit ile 4.1-4.3'e değiştirildi. Kuyucuklar, kalsiyum ile kırmızı-turuncu boyama oluşturmak üzere oda sıcaklığında yaklaşık 30 dakika 1 ml Alizarin kırmızı çözeltisi ile boyandı. Fazla leke, dH ile dört kez yıkanarak çıkarıldı. Adipojenik farklılaşma, Yağlı Kırmızı O kullanılarak değerlendirildi. Bir stok çözeltisi, 0.7 g Yağ Kırmızı O'nun (katalog no. Sigma O-062; Sigma-Aldrich) ile 200 ml izopropanol ilave edildi. Bu, gece boyunca karıştırıldı ve sonra bir 0.2-um filtreden geçirildi. Stok solüsyonu 4 ° C'de saklandı. Çalışma solüsyonu dört bölüm dH'ye 2 6 parçalık stok solüsyonu eklenerek yapıldı. Bu karıştırıldı ve 0,2 um'lik bir filtreden geçirilmeden önce oda sıcaklığında 20 dakika bırakıldı. Çukurlar iki kez dH ile yıkandı ve daha sonra oda sıcaklığında 5 dakika boyunca% 60 izopropanol ile dehidre edildi. İzopropanol çıkarıldı ve çukurlar yıkamadan kurutuldu. Hücreler, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 1 ml Yağ Kırmızı O solüsyonuyla boyandılar. Fazla leke, dH 2 ile dört kez yıkanarak çıkarıldı. Kondrojenik farklılaşma, proteoglikanlar için Alcian mavisi boyaması ile gösterildi. Slaytlar veya oyuklar oda sıcaklığında 3 dakika boyunca asetik asit ile inkübe edilmiş, bunu takiben 30 dakika boyunca RT'de Alcian mavisi uygulanmıştır. Fazla leke, asetik asit kullanılarak çıkarıldı ve slaytlar üç kez dH ile yıkandı. Picrosirius redi ayrıca kollajen depozisyonunu belirlemek için kullanıldı. RNA, TriZol (Thermo Fisher Scientific Life Sciences) kullanılarak özütlendi ve faz ayrımı ve bunu takiben bir RNeasy Micro (RNeasy Micro) kullanıldı. RNA Ekstraksiyonu RNA, Kit (Qiagen, Hilden, Almanya, https://www.qiagen.com). Örnekler, TriZol'de -80 ° C'de saklandığından özdeş koşullar altında analiz edilebilirler. Numuneler buz üzerinde çözüldü ve 1 ml TRIzol başına 200 ul kloroform eklendi; Bunlar 20 saniye boyunca elle çalkalandı, oda sıcaklığında 2-3 dakika bekletildi ve 12,000 rpm'de ve 4 ° C'de 20 dakika santrifüj edildi. RNA ihtiva eden üst, berrak tabaka (yaklaşık 200 ul) bir RNaz içermeyen 2 ml'lik Eppendorf tüpüne aktarıldı ve daha sonra RNeasy Micro Kit kullanılarak işlendi. RNA miktarı ve kalitesi NanoDrop (Thermo Fisher Scientific Life Sciences) kullanılarak, RNA / protein oranı 1.8-2.0 olan iyi kalitede RNA'ya eşittir. Superscript III ters transkriptaz, RNA'yı tamamlayıcı hale getirmek için kullanılır Deoksiribonükleik asit (cDNA). Toplam 500 ng ila 5 ug RNAse içermeyen su ile toplam 12 ul hacme seyreltildi. Daha sonra 1 ul rastgele primerler ve 1 ul 10 mM deoksinükleotit karışımı ilave edildi. Karışım 65 ° C'de 5 dakika boyunca denatüre edildi ve buz üzerinde en az 1 dakika soğutuldu. 4 ul birinci iplikçik tamponu (5 x konsantrasyon; Thermo Fisher Scientific Life Sciences), 1 μl 0.1M dithiothreitol ve 1 μl Superscript III ters transkriptaz enzimi (Thermo Fisher Scientific Life Sciences) içeren bir cDNA sentez karışımı. CDNA, 25 ° C'de 10 dakika, 60 ° C'de 60 dakika inkübe edilerek ve 15 dakika boyunca 70 ° C'ye ısıtılarak reaksiyonun durdurulmasıyla sentezlendi. CDNA, 4 ° C'ye soğutuldu ve kısa süreli kullanım için buzdolabında ve daha uzun süreli depolamalarda -20 ° C'de tutuldu. Polimeraz Zincir Reaksiyonu PCR Primerler, Bioline'den (London, UK, Http://www.bioline.com) bir liyofilize toz halinde eklendi ve 100 uM'lik bir stok konsantrasyonuna getirildi. 90 μl RNaz içermeyen suya 5 μl sol ve 5 μl sağ primer eklenerek 10 μM'lik bir çalışma konsantrasyonu yapılmıştır. PCR MyTaq DNA polimeraz (Bioline) kullanılarak gerçekleştirildi. Tepkime karışımı 5 ul MyTaq Reaksiyon Tamponu (5x konsantrasyon), 2 ul cDNA, 1 ul primer (10 uM, nihai konsantrasyon, 0.4 uM), 0.25 ul MyTaq DNA polimeraz ve 16.75 ul RNase- Serbest su Aşağıdaki primerler hücre kimliği için kullanıldı: CD31 (19459010) (F: GAAGTACGGATCTATGACTCA, R: GTGAGTCACTTGAATGGTGCA); CD34 (F: CATCACTGGCTATTTCCTGAT, R: AGCCGAATGTGTAAAGGACAG); CD45 (F: CATGTACTGCTCCTGATAAGA, R: GCCTACACTTGACATGCATAC); CD146 (F: AAGCAACCTCAGCCATGTCG, R: CTCGACTCCACAGTCTGGGAC); NG2 (F: GCTTTGACCCTGACTATGTTG, R: TCCAGAGTAGAGCTGCAGCA); Trombosit türevi büyüme faktörü β ( PDGFRβ ; F: CAGTAAGGAGGACTTCCTGGA, R: CCTGAGAGATCTGTGGTTCCA); Ve β-aktin ( ACTB ; F: CCTCGCCTTTGCCGATCC, R: GGAATCCTTCTGACCCATGC). Farklılaşma için kullanılan ilave primerler aşağıdaki gibidir: kolajen II ( COL2A1 ; F: GGAAACTTTGCTGCCCAGATG, R: TCACCAGGTTCACCAGGATTGC); SOX9 (F: ACATCTCCCCCAACGCCATC, R: TCGCTTCAGGTCAGCCTTGC); Aggrecan ( ACAN ; F: TGCGGGTCAACAGTGCCTATC, R: CACGATGCCTTTCACCACGAC), hiyalüronan ve proteoglikan bağlantı proteini 1 ( HAPLN1 ; F: CAACCAGTGCCTGTGTTGG, R: TATTGGTCCCTGTGGGTCT); Yüzeysel bölge proteini ( SZP ; F: CTCCTTTTTACAGCAAGGGCG, R: ATTATCCAGCCCGCTTCCAG); Runt ile ilgili kopyalama faktörü 2 ( RUNX2 ; F: ACTGGGCCCTTTTTCAGA, R: GCGGAAGCATTCTGGAA); Alkalin fosfataz canlı / kemik / böbrek ( ALPL ; F: TCAGAAGCTCAACACCAACG, R: GTCAGGGACCTGGGCATT); Osteokalsin ( BGLAP ; F: GCCTTTGTGTCCAAGC, R: GGACCCCACATCCATAG); Ve peroksizom proliferatör-aktive reseptör γ'yı içeren bir PCR reaksiyonu gerçekleştirildi. PCR ürünleri, bir moleküler ile çalıştırmak için 100 ml'lik bir alikot% 2 agaroz jeli kullanıldı ( PPARG ; F: TGAATGTGAAGCCCATTGAA, R: CTGCAGTAGCTGCACGTGTT) 1 kb'den az ağırlık (MW). Jeller, 2 g agarozun 100 ml 1 x TAE tamponunda (Tris baz, asetik asit ve EDTA; 1 saat 10 dakika dH'de seyreltilmiş, 10 x konsantrasyonda TAE, dH 2'de çözündürülerek hazırlandı: Thermo Fisher Bilimsel Yaşam Bilimleri) mikrodalga fırında tüm agaroz çözünene kadar ısıtılarak ısıtılmıştır. Daha sonra 10 ul Jel Kırmızı eklendi (10,000 x konsantrasyon [catalog no. 41003; Biotium, Freemont, CA, https://biotium.com]). Jel bir jel-döküm tepsisine yüklenmiştir; Örnek tarağı yerleştirildi ve oda sıcaklığında katılaşmasına izin verildi. Tepsi 1X TAE ile kaplanmış bir elektroforez tankına yerleştirildi ve taraklar çıkarıldı. CDNA örnekleri RNaz içermeyen su ile 10 ul'ye seyreltildi, yükleme boyası (2 ul, 6 x konsantrasyon) ile karıştırıldı ve bir numuneye pipetle yerleştirildi. Bant boyutlarının tanımlanabilmesi için düşük MW'lık bir DNA merdiveni çalıştırıldı. Elektroforez 110 V'de 1 saat çalıştırıldı. Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR Nicel gerçek zamanlı PCR, bir Lightcycler 480 (Roche Life Sciences, Indianapolis, IN, https://lifescience.roche.com). CDNA, 384 oyuklu bir plakaya üç kopya halinde (oyuk başına 2 ul) yerleştirildi. Aşağıdakileri içeren tüm numuneler için primer spesifik karışımlar oluşturuldu: 5 ul SYBR yeşil master karışımı (2x konsantrasyon; Roche Life Sciences), 2 ul primerler (sağ ve sol, 5uM, nihai konsantrasyon 1uM olacak şekilde seyreltildi) , Ve 1 ul RNaz içermeyen su. Kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) için kullanılan hedef gen primerleri aşağıdaki gibidir: kollajen I ( COL1A1 ; F: GGAACACCTCGCTCTCCA, R: GGGATTCCCTGGACCTAAAG); COL2A1 (F: CAGAGGGCAATAGCAGGTTC, R: AGTCTTGCCCCACTTACCG); SOX9 (F: GTACCCGCACTTGCACAAC, R: TCTCGCTCTCGTTCAGAAGTC); Ve ACAN (F: CCTCCCCTTCACGTGTAAAA, R: GCTCCGCTTCTGTAGTCTGC). En istikrarlı olanı belirlemek için üç referans geni test edildi: gliseraldehit 3-fosfat dehidrojenaz ( GAPDH ; F: AGCCACATCGCTCAGACAC, R: GCCCAATACGACCAAATCC); Hipoksantin-guanin fosforibosil transferaz ( HPRT 1; F: GTAGCCCTCTGTGTGCTCAA, R: TCACTATTTCTATTCATGCTTTGATG) ve ACTB (F: ATTGGCAATGAGCGGTTC, R: CGTGGATGCCACAGGACT). Daha sonra 8 ul primer karışımı oyukların her birine eklenmiştir. Plaka bir sızdırmazlık folyosu kullanılarak kapatılmış ve analizden önce (2 saatten az) 4 ° C'de saklanmıştır. QPCR çalışma protokolü, 5 dakika boyunca 95 ° C'lik bir başlangıç ​​ön inhubasyondan sonra 45 amplifikasyon çevriminden (10 saniye için 95 ° C; 10 saniye için 60 ° C; tek bir tespit ile 5 saniye boyunca 72 ° C) oluşmaktadır. Erime eğrisi analizi derece santigrat derece başına 5 kazanımla 65 ° C'den 97 ° C'ye ısıtılarak gerçekleştirildi. İstatistiki Analizler Tüm istatistiksel analizler İstatistiksel Paket Sosyal Bilimler için (sürüm 21; IBM, Armonk, NY, http://www.ibm.com).

Sonuçlar Histoloji ve İmmünohistokimya Toplam diz replasmanı geçiren bir hastadan alınan doku kesitlerinde, adipositler, içerdikleri lipid doku işlemi sırasında çözündüğünden soluk çıktı. Geride kalan hücre membranları, ağ benzeri bir görünüme sahipti. Küçük kılcal damarlar, bu hücre membranları arasında, daha büyük damarlarla, duvarların düz kas içerdiği, adipositlerin her tarafında dağılmış haliyle koştular. Sinovyal membran dokunun sağ tarafında bulunur (Şek.). Sinovyum villöz …

Devamını Oku »

Kalıtsal pankreatit (HP), hem akut hem de kronik pankreatitin özelliklerini gösteren otozomal dominant bir hastalığıdır . İnsan katyonik tripsinogenindeki mutasyonlar HP ile ilişkilidir ve pankreatit patogenezinde bazı bilgiler sağlamıştır ancak pankreatitin başlatılmasından sorumlu mekanizmalar aydınlatılamamıştır ve apoptoz ve nekrozun rolü şu şekildedir: (19459007) PRSS1 Çok tartışılan. Bununla birlikte, pankreatik akinar hücre içerisinde erken tetiklenen, tripsinogen'in başlatma sürecinde önemli bir rolü olduğu genel olarak kabul edilmiştir. HP'nin işlevsel çalışmaları, hastalığın gelişimini otantik olarak taklit eden bir deney sisteminin bulunmaması nedeniyle sınırlandırılmıştır. Bu nedenle, sıçanın akinar hücrelerinde insan katyonik tripsinogen ekspresyonunun pankreatiti teşvik edip etmediğini belirlemek için, vahşi tip (WT) insan PRSS1 veya iki HP ile ilişkili mutant (R122H ve N29I) kullanarak yeni bir transjenik fare modeli sistemi geliştirdik. Sıçan elastaz promotörü üretilen üç transgenik suş içerisinde pankreatik asinar hücrelere transgen ekspresyonunu hedeflemek için kullanıldı: Tg (Ela-PRSS1) NV, Tg (Ela-PRSS1 * R122H) NV ve Tg (Ela-PRSS1 * N29I) NV. Fareler, immünohistokimyasal ve biyokimyasal olarak histolojik olarak analiz edildi. Transgen ekspresyonunun pankreatik asiner hücrelerle sınırlı olduğunu ve transjenik PRSS1 proteinlerinin pankreas salgı yolunu hedeflediğini bulduk. Tüm transgenik suşlardan alınan hayvanlar, asiner hücre boşalması, inflamatuvar infiltratlar ve fibroz ile karakterize pankreatiti geliştirdi. Transgenik hayvanlar aynı zamanda düşük doz serulein ile tedavi edildiğinde kontrollere göre daha ağır pankreatit geliştirdiler ve ödem, inflamasyon ve genel histopatoloji açısından anlamlı derecede yüksek skorlar sergilediler. Asit hücrelerinde PRSS1, WT veya mutantların ekspresyonu, pankreatik dokularda ve izole asiner hücrelerde apoptozu arttırdı. Üstelik, izole akinar hücreler üzerine yapılan çalışmalar, transgen ekspresyonunun nekrozdan ziyade apoptozu teşvik ettiğini göstermiştir. Bu nedenle, murin asiner hücrelerde WT veya mutant insan PRSS1'in ekspresyonunun apoptozu indüklediğini ve hücresel hakarete yanıt olarak artmış olan spontan pankreatiti teşvik etmek için yeterli olduğuna karar verdik. Anahtar kelimeler: [19459013Herediterpankreatit(HP)akutpankreatit(AP)tekrarlayanataklarlakarakterizedirvebuataklarınsıklıklailerlemekaydettiğiakutpankreatit(AP)ataklarıilekarakterizedir Ekzokrin ve endokrin yetersizliği olan kronik pankreatit (CP) 1, 2, 3 HP, insan katyonik tripsinojen geninde (proteaz serin 1) mutasyonlar ile ilişkilidir PRSS1 . HP hastalarında en sık rastlanan iki mutasyon PRSS1 R122H ve N29I'dir. 5 Biyokimyasal çalışmalar, her iki mutasyonun da, 'tryp' için artan bir eğilimin neden olduğu bir 'kazanç' ile ilişkili olduğunu göstermiştir Sin aracılı tripsinojen otoaktivasyonu. 6, 7 Buna ek olarak, R122H mutasyonu, tripsini otomatik hidrolize dirençli hale getirir ve protein stabilitesini arttırır. 4, 8, 9 Trypsinojen aktif olmayan bir prekürsördür Duodenal enterokinaz ile aktive tripsin haline getirilen pankreasın asinar hücreleri tarafından salgılanır. 10 Tripsin, kendisini ve diğer pankreas sindirim enzimi prekürsörlerini harekete geçirme kabiliyeti nedeniyle sindirimde önemli bir role sahiptir. Bu, tripsinojenin uygun olmayan intra-asinar aktivasyonunun, aşı hücresinin, tripsin aktivitesinin% 20'sine kadarını inhibe edebilen PSTI (pankreas salgı tripsin inhibitörü veya SPINK1) gibi koruyucu mekanizmaları bastırabilecek bir kaskad başlattığına ilişkin hipoteze yol açmıştır , 11, 12, 13, 14 pankreatit ile sonuçlanır. 15, 16 Pankreatit başlandıktan sonra, inflamatuar hücre infiltrasyonu, pro-inflamatuar mediatörlerin salınması ve hücre ölümü gibi sekonder olaylar 17, 18, 19 AP'nin deneysel modelleri, asinar hücre ölümünün hem apoptoz hem de nekroz yoluyla ortaya çıkabileceğini ve bunun da daha ciddi bir sonuç ile korele olduğunu göstermiştir. , 20, 21 Deneysel pankreatitte tripsinogenin intra-asinar aktivasyonu gösterilmiş olmasına rağmen, kesin aktive mekanizması ve tripsinin pankreatit gelişimindeki rolü açıklığa kavuşmamıştır. Archer ve ark. 22 trypsinojenin in vivo rolünü araştırmak için, mutasyona uğramış bir fare tripsinogen geninin akinara spesifik ekspresyonuna dayanan bir model geliştirdi , Insan R122H mutasyonuna denk düşen ve hayvanlarda yaş arttıkça fibrotik değişikliklerin kanıtlanması ile akut pankreas hasarının erken başlangıçlı olduğunu bildirmiştir. İnsan katyonik tripsinogeninin R122H mutantının ekspresyonuna dayanan bir başka fare modeli de geliştirildi; Bununla birlikte, bu hayvanlar muhtemelen düşük transgen ekspresyonu nedeniyle spontan bir fenotip geliştirmede başarısız oldu. 23 Bu çalışma, vahşi tip (WT) insan katyonik tripsinojeni PRSS1, spontan pankreatit ile sonuçlanacak mı, yoksa PRSS1'in mutant formlarının (özellikle HP'ye bağlı PRSS1 R122H ve N29I) ekspresyonunun hastalığın teşvik edilmesi için gerekli olup olmayacağı yeterli olacaktır. Çalışmalarımızı iki ana nedenden ötürü insan tripsinojeni (PRSS1) üzerine kurmayı tercih ettik: (1) diğer memeli tripsinojenlerle karşılaştırıldığında 24, 25 otomatik aktivasyon eğiliminin yüksek olması ve (2) çünkü Bilinen fare tripsinogen genlerinden hangisinin mutasyon HP'ye neden olabilen ana insan tripsinojeni olan PRSS1 ortologudur belirsizdir. Her üç suşun hayvanlarının spontan pankreatit geliştirmeye daha yatkın olduklarını ve serülan meydan okumadan sonra bunun arttığını göstermektedir. Verilerimiz, WT veya mutant olsun, insan PRSS1 geninin ekspresyonunun bu hayvanları pankreatit geliştirmesine yatkınlaştırdığını göstermektedir. Buna ek olarak, çalışmalarımız, nekroz yerine asinar hücre apoptozunun, transgen ekspresyonuyla ve dolayısıyla model sistemimizde pankreatit gelişimi ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir.

Sonuçlar PRSS1 transgenik fareleri, insan PRSS1'i dokuya spesifik bir şekilde eksprese ettik. Üç transgenik fare suşu Tg (Ela-PRSS1) NV, Tg (Ela-PRSS1 * R122H) NV ve Tg'yi (Ela-PRSS1 * N29I) NV, transgen ekspresyonunu hedeflemek için bir sıçan elastaz promotörünü kullanarak pankreasın asinar hücrelerinde WT'yi veya PRSS1'in iki mutasyona uğratılmış formundan (R122H ve N29I) birini ifade etmiştir. Bundan böyle bu suşlar Sırasıyla …

Devamını Oku »

Google, bundan sonra reklam engelleyici kullanan kullanıcılardan ücret alınmasına izin verecek!

     Reklam sektörü gerçek hayatta olan kadar ( belki de daha fazla ) günümüzde, dijital ortamda da büyük bir kar payına sahip. Bu bağlamda başlıca gelir kaynaklarından biri reklamlar olan Teknoloji devi Google yeni aldığı bir karar neticesinde AdBlock gibi reklam engelleyici ] Yazılım seçenekleri kullanan kullanıcıların farklı bir yaptırıma tabi tutulması izin verecek.                           Google'dan AdBlock kullanıcılarına kötü …

Devamını Oku »

Uyarıcı ilaçlar beynin dopamin nörotransmisyonunu şiddetlice artırır ve kronik kullanım mezolimbikte nöro-adaptif değişikliklere yol açar. [1945900] Dopamin sistemi ve bazal ganglia yapılarındaki morfolojik değişiklikler. Bu değişikliklerin altında yatan mekanizmalar hakkında çok az şey biliniyor, ancak klinik öncesi kanıtlar, dopamin sentezi ve depolamasında koenzim olan demirin aday arabulucu olabileceğini gösteriyor. Demir bazal gangliyonlarda yüksek konsantrasyonlarda bulunur ve uyarıcı ilaçlar demir homeostazını etkileyebilir. Kokain bağımlılığında görülen morfolojik beyin değişikliklerinin beyindeki ve çevredeki anormal demir düzenlenişiyle ilişkili olduğunu varsaydık. Kemik bağımlılığı olan 44 hasta ve 44 sağlıklı kontrolte kantitatif duyarlılık haritalaması ve çevredeki kan dolaşımındaki demir markörleri kullanılarak beyinde demir konsantrasyonu tespit edildi. Kokain bağımlısı bireyler, globus pallidus'unda, kokain kullanım süresi ile güçlü korelasyon gösteren aşırı demir birikimi ve kırmızı çekirdekte düşük demir seviyeleri ile ilişkili olan periferik hafif demir eksikliği gösterdi. Bulgularımız, kokain bağımlılığında demir bozukluğunun oluştuğunu ve bunun kronik kokain kullanımından kaynaklandığını ortaya koymaktadır. Bu bireylerde Putamen'in genişlemesi demir konsantrasyonlarıyla ilgisizdir ve bu durumun, sırasıyla kokain bağımlılığının yatkınlığını ve sonuçlarını yansıtan eş zamanlı ortaya çıkan morfolojik değişiklikler olduğunu ileri sürmektedir. Kokainin demir metabolizmasını etkilediği mekanizmaları anlamak, yeni terapötik hedefleri ortaya çıkarabilir ve kokain bağımlılığının progresyonuna ve tepkisine ek olarak, zayıflıkların biyolojik belirteçleri olarak beyindeki ve çevresindeki demir seviyelerinin değerini belirleyebilir. Giriş Uyarıcı uyuşturucu bağımlılığında yapılan nörobilimsel araştırmalar, bağımlılığın nörobiyolojisi konusundaki anlayışımızı geliştirmiştir. Bu gelişmeler henüz daha etkili tedavilere veya önleme stratejilerine dönüşmese de, bağımlılığın bir beyin bozukluğu olduğuna açıkça gösterdiler. 1 Bunun için kritik olan, morfolojik beyin değişikliklerinin uyarıcı ilaçlarla ilişkili olduğunun kanıtı olmuştur 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 Klinik öncesi hayvan modelleri, bu bağımlılığın, en sıklıkla uyarıcı madde bağımlısı bireylerde görülen putamenin genişlemesidir. Ventral striatumdaki dopamin D2 reseptöründeki uyarıcı maddeden kaynaklanan düşüşün direkt olarak dorsal striatumdaki (putamen) hacim artışı ile bağlantılı olduğu anormallik, ilaç etkilerinden kaynaklanmaktadır. 9 Bu, hipotezi Gönüllü uyuşturucu kullanımından zorlayıcı ilaç alımına davranışsal değişimdeki ventral-dorsal ilerleme 10 ve putamen hacminin artması transitin sinirsel bir alt tabakasını yansıtabilir Bağımlılık üzerine. Bununla birlikte, uyarıcı madde bağımlısı bireylerden etkilenmeyen birinci derece akrabalarında 5 ve obsesif kompulsif bozukluk (OKB) olan hastalarda 11 putamen genişlemesinin kısmen temsil edilebileceği düşünüldüğünden Zorlayıcı davranışlar için predispozan bir faktör. Bağımlılıktaki bu morfolojik beyin değişimleri iyi karakterize edilmiş olsa da, primer farmakolojik etkisi dopamin iletimini arttırmak olan uyarıcı ilaçların bu değişikliklere neden olduğu mekanizmaları bilinmemektedir. Potansiyel bir aday arabulucu, dopamin metabolizması ve depolanması için enerji sağlayarak dopamin sentezi de dahil olmak üzere birçok fizyolojik süreçte yaşamsal bir role sahip olan demir olabilir. 12 Demirin her ikisinde de oynadığı önemli rol göz önüne alındığında Sağlık ve hastalık, metabolizması çok sıkı düzenlenir. Temel bir mikro besin maddesi olan demir diyetten alınmalıdır ve atılabilir (kan kaybı hariç). Aşırı demir, reaktif oksijen türleri 13 üretimiyle nöronal ölümle sonuçlanabileceğinden ve demir eksikliği dopamin sentezini ve monoamin metabolizmasını etkiler. 14 Homeostaz Bu nedenle, çeşitli, oldukça karmaşık ulaşım sistemleri ve geribildirim döngüleri aracılığıyla dikkatlice kontrol edilir. 15, 16 Demiri düzenlemedeki bozulmalar bu nedenle çeşitli seviyelerde ortaya çıkabilir ve bunların arasında nörodejeneratif olan belirgin çeşitli patolojiler ortaya çıkabilir 17, 18 Demirin düzenlenmesinde kritik olan, kan-beyin bariyeri olup, çevresel demir düzeylerini beyinden ayırmaktadır. Demir, transferrin reseptörleri (TfR1) ve çift değerli metal taşıyıcı 1 (DMT1) yoluyla diferansiyel transferrin (Tf) olarak beyine girer. Transmbran proteini ferroportin 1, demiri luminalden abluminal yönde bir demir atomuna nakleder. 16, 20 burada ferritin olarak, esas olarak oligodendrositlerde, fakat aynı zamanda mikroglia ve astrositlerde depolanmaktadır. 21 Beyin, en çok metabolik açıdan aktif organlardan biri olduğu için Vücuda demir talebi genellikle transferrin alım oranını aşar, bu da stokların iç depolamadan düşürülmesi anlamına gelir. 22 Dahili deponun talebi karşılayabilmesini sağlamak için, İnflamasyon veya hipoksi olayı, beyin parankimindeki demir taşınımı, peptid hepcidin tarafından düzenlenir. 20, 23 Ancak demirin beyindeki bölgesel dağılımı eşit değildir. Bazal gangliyonlar gibi dopaminle zengin beyin bölgeleri özellikle demir birikimine açıktır, ancak demirin bölgesel dağılımını belirleyen faktörler halen kaçınılmazdır. 12 Çeşitli kanıtlar, demirin düzensizliğini Uyarıcı madde bağımlılığında homeostaz. İlk olarak uyarıcı ilaçların düzenli kullanılması kan-beyin bariyerinin geçirgenliğini arttırarak daha fazla demirin beyin parankimine girmesini sağlar. 13, 24 İkincisi, hayvan modellerinde uyarıcı maruziyetin demir ile ilişkili olduğu gösterilmiştir Esas olarak oligodendrositlerde bazal gangliyonlarda birikim. 25 Üçüncü olarak uyarıcı ilaçlar doğuştan gelen bağışıklığı bozuyor 26 kronik uyarıcı kullanıcıları enfeksiyona ve kronik enflamasyona karşı savunmasız hale getiriyor 27 rahatsız edici Demir emilimini veya heam sentezini azaltarak periferik demir homeostazını azaltır ve bu azalmış serum demir ve transferrin doygunluğuyla yansıtılır. 28 Son olarak, kronik uyarıcı ilaç kullanımı diyet tercihlerini özellikle yağlı gıdalara değiştirebilir 29 , 30, 31 demir taşıyıcı ve biyoyararlanım eksikliği nedeniyle demir absorpsiyonunu etkiliyor. Kokain bağımlılığının bozulma ile bağlantılı olduğunu varsaydık Bu, beyindeki demir konsantrasyonunun artması ve kandaki demir seviyesinin azalması ile yansıtılır. Bu nedenle, kantoksik bağımlılığı olan yaş ve sağlıklı kontrol gönüllüleri bulunan hastalarda, kantitatif duyarlılık haritalaması 32 ve çevresel olarak kan dolaşımındaki işaretleyicileri kullanarak beyindeki demir konsantrasyonunu belirlemeye çalıştık. Kokain bağımlısı hastalarda beyin demir seviyesinin artmasının kokain kullanım süresiyle ve bazal gangliyon hacmiyle ilişkili olacağını öngördük. Malzemeler ve yöntemler Kokain bağımlılığı için DSM-IV-TR ölçütlerini karşılayan, kronik bir kokain öyküsü olan 44 bireyi (% 95 erkek) ve 44 eşleştirilmiş sağlıklı kontrol gönüllüsünü (% 93'ü eşleştirilmiş) araştırdık Çalışma örneği ve prosedürleri Erkek) ilaç ya da alkol bağımlılığı öyküsü olmayan bir gruptur. Kokain bağımlılığı tanısı, DSM-IV için Yapısal Klinik Görüşme kullanılarak belirlendi ve bu kişilere daha sonra kokain kullanım bozukluğu (CUD) adı verildi. Kontrol katılımcılarından hiçbiri madde bağımlılığı için DSM-IV-TR kriterlerine hiç uymadı; Ayrıntılı bilgi için Ek Malzeme sayfasına bakınız. Bütün katılımcılar tıbbi bir gözden geçirme ve psikiyatrik taramadan önce yazılı bilgilendirilmiş onam vermiştir. Dışlama kriterleri, başlıca medikal veya nörolojik hastalık, psikotik bozukluğun ömür boyu öyküsü, travmatik bir kafa travması öyküsü ya da MR taramaya yönelik herhangi bir kontrendikasyon içermektedir. Diyetle alınan demir miktarı, Gıda Frekansı Anketi'nden (http://www.srl.cam.ac.uk/epic/nutmethod/FFQ.shtml) hesaplanmıştır. Demir absorpsiyonundaki diyetle ilgili varyasyonlar, Hallberg ve Hulthen tarafından geliştirilen algoritmalar kullanılarak tahmin edildi. 33 Tüm katılımcılar, serumdaki demir proteinlerinin (yani, ferritin, demir, transferrin), hepcidin'in -25, akut enflamasyon (yani C-reaktif protein (CRP)) ve hematolojik durum. Nörogörüntüleme veri toplama Tüm katılımcılar, manyetik rezonans beyin taramalarına tabi tutuldu (12 / EE / 0519, PI: KDE) 3T Siemens Magnetom Tim-Trio tarayıcısı kullanarak Cambridge Üniversitesi (İngiltere) Wolfson Beyin Görüntüleme Merkezi'nde. Tüm katılımcılar için T1 ağırlıklı görüntüler (MPRAGE) ve duyarlılık ağırlıklı görüntüler (SWI) elde edildi. Beyin taramaları nöroradyologlar tarafından normal radyolojik görünüm için tarandı. Bir kontrol katılımcısından ve üç CUD hastasından alınan veriler, kalitesizlik nedeniyle kaldırıldı ve toplam 84 katılımcı bırakıldı (43 kontrol, 41 CUD). Ayrıntılı beyin görüntüleme yöntemleri Ek Malzemede verilmektedir. İstatistiksel analiz Veriler aşağıda özetlenen beş adımlı bir strateji kullanılarak analiz edildi ve tam olarak açıklandı Ek Malzemede. Tüm istatistiki testler iki taraflıydı. Birden fazla istatistiksel testin ışığında ilk P eşik değerini (0.05) 10 olarak bölerek P değerini uyguladık ve sonuçta eşiğin P <0.005. Bununla birlikte, bu bir keşif analizi olduğu için, tartışmada önemli olarak değinilmemesine rağmen P <0.05 eşiğine ulaşan sonuçlar da bildirilmiştir. Demografik özellikler, klinik veriler ve periferik demir işaretleyicileri bağımsız örnek t testleri veya Mann-Whitney kullanılarak SPSS (v21) U -test. Kategorik veriler için ki-kare veya Fisher kesin testleri kullanıldı. Bütün beyin seviyesinde, gri madde hacmi karşılaştırmaları, permütasyon testi için FSL-VBM ve CamBA kullanılarak MPRAGE görüntülerinde yapıldı. Kantitatif duyarlılık haritaları (QSM), beyin demir konsantrasyonunun onaylanmış bir ölçüsüdür, 32 SWI verilerinden yeniden oluşturuldu. 34 Kısaca, çok kanallı karmaşık veriler değiştirilmiş uyarlamalı bir algoritma kullanılarak birleştirildi. [35] Birleştirilen faz görüntüleri sürekli bir Laplace yaklaşımıyla, 36 ve yerel alan küresel ortalama değer filtreleme ile arka plan alanının küresel ekstraksiyonu ile ortaya çıkmıştır. 37 QSM, morfolojik olarak etkin, doğrusal olmayan dipol inversiyon yöntemi, ile tahmin edilmiştir 38 ve haritalar daha önce tarif edilen bir işleme akışı ile çalışma açısından bir alana çarpıldı 34 ANT kullanan (v2.1). Son olarak, QSM istatistiksel analizi için FSL Randomize (v2.9) kullanılmıştır. Büyük grup farklılıklarının tüm beyin haritaları. ( a ) Tüm beyin seviyesinde modüle edilmiş gri cevher hacminin grup karşılaştırması. Mavi renkte olan vokseller, kokain kullanım bozukluğu (CUD) olan hastaların gri cevher hacmini azalttığı beyin bölgelerini gösterir QSM grubu şablonu üzerinde manuel olarak izlenen dokuz demir açısından zengin yapılar için ilgi bölgeleri (ROI'lar) tanımlandı. Buna ek olarak, putamen ve globus pallidus (GP) 'deki gri cevher olasılıklarına karşı QSM'yi doğrudan doğruya karşılaştırmak için, FSL-FIRST (ve)' yi kullanarak MPRAGE şablonuna subkortikal segmentasyon için otomatik ve tekrarlanabilir bir algoritma uyguladık. Her ROI için ortalama ve medyan değerler, grup karşılaştırması ve korelasyon analizi için SPSS'ye aktarıldı. Demir konsantrasyonundaki bölgesel grup farklılıkları. ( a ) Demir açısından zengin beyin bölgelerinin ilgi alanındaki (ROI) tabanlı bir yaklaşımdaki demir konsantrasyonunun grup karşılaştırması. CUD hastaları globus pallidusunda% 14'lük QSM'de anlamlı bir artış gösterdi ] Kokainle ilgili anormallikler. ( a ) İlgi alanımız olan globus pallidus'un (GP) illüstrasyonu. ( b ) GPe'deki demir konsantrasyonunun post-hoc karşılaştırması, CUD hastalarında QSM düzeyleri … Olası önceden var olan anormallikler. ( a ) İlgilendiğimiz bölgemiz olan putaemin illüstrasyonu. ( b ) Gri cevher hacminin grup karşılaştırmaları, CUD hastalarında kontrollerle karşılaştırıldığında belirgin bir artış gösterdi. [ c ) KSÇ Seviyeleri Ölçülebilir Değil … Korelasyon analizi ayrı olarak gerçekleştirildi Beyin yapısı, yaşı ve kokain kullanım süresi ile beyin ve çevresindeki demir konsantrasyonu arasındaki ilişkileri incelemek için her bir grupta değerlendirildi. GP'de demir konsantrasyonunun öngörücüleri, DSM-IV uyuşturucu bağımlılığı durumuna, sigara içme durumuna, serum ferritin ve transferrin saturasyonuna sahip SPSS'deki çoklu regresyon modeli, prediktör değişkenleri olarak dahil edilmiştir.

Sonuçlar Demografik veriler ve periferik demir işaretleyicileri İki grup yaş, cinsiyet, el koyma, vücut kütlesi ve alkol tüketimi açısından eşleştirildi (). Gruplar yaşamsal bulgular bakımından farklı değildi, bu da CUD hastalarının şiddetli sarhoş olmadığını gösterdi.

Devamını Oku »

BA normal uçuş hizmetini IT'den sonra yeniden kurmayı hedefliyor …

                                                                                                          10 Ocak 2017 tarihli bu fotoğraf fotografında yer alan British Airways uçakları, Londra'daki 48 saatlik bir kabin ekibi grevinde Heathrow Havalimanı'na park edildi. Havayolu şirketi, 27 Mayıs 2017 Cumartesi günü İngiliz Hava Yolları'ndaki bilgisayar sistemlerinin başarısızlığından dolayı ertelendiğini belirtti. BA, "IT sistemleri kesildi" denilen açıklamada özür diledi ve sorunu çözmek için çalıştığını söyledi. Cumartesi …

Devamını Oku »

Önce kilo verdi sonra fenomen oldu!

                     2017-05-28 11:48:00                                                                      Avusturalya'da yaşayan Kate Yazar spor ve diyetle tam 55 kilo verdi. Bu makerasını sosyal medyada paylaşan Yazar fenomen haline geldi. Avustralya'da yaşayan Kate Yazar bildi bileli kilolarıyla başı dertteydi. Genç kadın 25 yaşına geldiğinde 120 kiloya kadar ulaşmıştı. Tam bu dönemlerde Nick Jones ile tanıştı ve nişanlandı. Çevresi sağlığı için kilo vermesi gerekenleri …

Devamını Oku »

Google AlphaGo alçak gönüllü olaydan sonra emekli olur …

                                                                           üç oyun serisini süpürmek için Cumartesi günü Çin'in Ke Jie'si olan brash 19 yaşındaki dünyayı bir numaraya yenmişti                                AlphaGo, yapay zekanın (AI) ne kadar ilerlediğinin bir ölçüsü olarak yakından takip edilen üç oyun serisini süpürmek için 19 yaşındaki Çinli Ke Jie'yi bir numaralı Çin'in Ke Jie'sini mağlup etti      Google'ın sahip olduğu bilgisayar algoritması …

Devamını Oku »

Uzaydaki 9 aydan sonra, fare spermleri sağlıklı hale …

                                                                                                                                          Kredi: martha sexton / public domain      Uzayda dokuz ay geçtikten sonra, fare spermleri sağlıklı farlar üretti, Japon bilim insanları Pazartesi günkü bir haberde.                                                                       Dondurularak kurutulmuş sperm örnekleri 2013'te Uluslararası Uzay İstasyonuna fırlatıldı ve 2014'te Dünya'ya geri döndü. Uzayın yoğun ışınlanması, spermde hafif DNA hasarına neden oldu. Yine de, in vitro fertilizasyon …

Devamını Oku »

1998 ve 2015 arasındaki çarpışma testi Ölüm hızı, eski araçlarda 4 kat daha yüksekti Avustralya ve Yeni Zelanda'nın bağımsız araç güvenlik grubu ANCAP, iki yıl arasında yapılan bir çarpışmayı, 1998 ve 2015 yılları arasında Corollas (2015 Corolla, İngiltere'de Toyota Auris olarak bilinir) yeni ve eski arabalar arasındaki güvenlik özelliklerinin arasındaki farkı sergilemek için. Çarpışma görüntüleri aşağıdaki videoda görülebiliyor – yolcuların modern eşdeğerlerinin yapısal katılıklarına sahip olmayan yaşlanan arabalara maruz kaldıkları muazzam gücü gösteriyor. 2000 yılı öncesinde yapılan araçların, ölümcül bir kaza geçirme olasılığının 2011 yılı sonrasına göre dört kat fazla olduğunu düşündüren analizle ilgili olarak, Corollas çifti birbirlerine 40 mil hızla başlatıldı. ] ANCAP CEO'su James Goodwin, "Eski araba, kukla göstergelerle katastrofik yapısal bozulmayı sürdürdü ve sürücüde ciddi kafa, göğüs ve bacak yaralanması riski çok yüksekti" dedi. "16 puantan sadece 0,40 puan – sıfır yıldız elde etti. "Bunun aksine, mevcut model 16 puantan 12.93'ü bulan beş yıldızlı bir koruma seviyesiyle çok iyi performans gösterdi. "Güvenlik, lüks değil, herkesi yolda güvende tutmak istiyoruz; bu nedenle tüketiciler, gündüzleri güvendiği en güvenli otomobil ve ihtiyaçlarına en güvenli otomobil arayın" Deney, Euro NCAP tarafından 2017 yılının başlarında gerçekleştirilen ve Rover 100'in 1997'den yeni Honda Caz tarafından 40 mil / saat hızla düşürülmesiyle sonuçlanan başka bir teste benzemektedir; bu durumda Bir duvarın içine. İzle: 40mph kazasında Rover 100 ve Honda Jazz Şu anda satışa sunulan en güvenli supermini olan Jazz, etkisinden sonra şeklini korurken, 20 yaşındaki Rover neredeyse parçalandı. Avustralya araç filosundaki verileri analiz eden ANCAP, ulusal araç nüfusunun yalnızca yüzde 20'sini temsil etmesine rağmen, 2000 yılı öncesi modellerin ölüm oranına neden olan kazaların yüzde 33'ünde yer aldığını tespit etti. Bununla birlikte, 2011 sonrası araçların Avustralya yollarındaki tüm arabaların yüzde 31'ini oluşturmasına rağmen, yalnızca birinin öldüğü çarpışmaların yüzde 13'ünde yer alırlar. Goodwin, "Ölümcül kazaların oranı eski araçlar için dört kat daha fazladır" dedi. "Ölümcül bir çarpışmaya karışan bir aracın ortalama yaşını takip ediyoruz ve sadece bir yılda ortalama 12.5 yıldan 12.9 yıla yükseldiğini gördük. Bu, yenilenen bir ulusal odağın ve daha güvenli araçlar için daha büyük desteğin gerekliliğini vurguluyor. " Benzer yol, Yeni Sürüş Yolcu Araçlarının Ortalama Yaşının 14.3 Yaş olduğu Yeni Zelanda'da Bulunmuştur, Fakat Ölümcül Çökmelere Yerleştirilen Aracların Ortalama Yaşı 15.6 Yıldır.

Yeni bir araba satın alırken modern güvenlik cihazları ne kadar önemlidir? Aşağıdaki yorum bölümünde bize bildirin … Kaynak

Devamını Oku »

Renault, Cyberattack Tarafından Vurulduktan Sonra Siteleri Kapatıyor

                         Fransız otomobil üreticisi Renault Cumartesi günü, dünyanın çeşitli alanlarında siber saldırı dalgalarının vurulduğunu ve virüsün yayılmasını önlemek için çeşitli sitelerde üretimi durdurmaya zorladığını söyledi. Bir sözcüsü AFP'ye verdiği demeçte, "Biz etkilentik" diye bir durum tespit etmeye çalıştıklarını söylediler. "Dün gece başından beri iş başlıyor, bu saldırıya karşı koymak için gerekli olanı yapıyoruz" Saldırı, Renault'u virüsün yayılmasını önlemek için alınacak …

Devamını Oku »

İngiltere, siber sistemden sonra hastane sistemlerini yenilemek için çalışıyor …

                                     İngiltere'nin Ulusal Siber Güvenlik Merkezi, onlarca ülkenin İngiliz hastanelerini hastalar için tedaviyi iptal etmesini ve ertelemesini zorlayan küresel bir siyaha karşı saldırının ardından ekipler hastane bilgisayar sistemlerini geri yüklemek için "24 saat boyunca" çalışıyor diyor.                                                                       Bilgisayarları kilitleyen ve kullanıcıların fidye için dosyalarını tutan saldırı, türünün en büyüğü olduğuna inanılıyordu. Birkaç siber güvenlik şirketi, görünüşte Rusya'yı en zorlayan …

Devamını Oku »

Aston Martin ve Lagonda projesi ikilisi, yıllar sonra gizlenerek açık artırmaya başlıyor

     Hisse      Facebook          Cıvıldamak          Pinterest          e-posta             Belirli bir klasik otomobilin değerine bağlı olarak, restorasyonu haklı çıkarmak için gereken orijinal sac metalin miktarı değişir. Bazen, gereken tek şey bir şasi numarasıdır – biz bunu çeşitli nadir Ferrariler ile her zaman görüyoruz. Hesap şu şekildedir: Şasi numarasını satın alırsınız ve diğer her şey gövde malzemesidir. Şasi …

Devamını Oku »

Gelişmekte olan tamamlayıcı metal oksit yarı iletken (CMOS) tabanlı, yüksek yoğunluklu mikroelektrod dizisi (HD-MEA) Cihazlar, subselüler seviyede yüksek mekansal çözünürlük ve çok sayıda okuma kanalları sağlar. Bu cihazlar, çok sayıda elektron tarafından tespit edilen her nöronla çok sayıda nöronun ekstraselüler aktivitesinin aynı anda kaydedilmesine olanak tanır. Kaydedilen sinyalleri analiz etmek için, spike olayları, "sivri uçlu sıralama" olarak adlandırılan bir süreç olan bireysel nöronlara atanmalıdır. Bir dizi kaynak sinyalinin doğrusal bir karışımı olan gözlemlenen sinyaller grubu için bağımsız bileşen (IC) Analiz (ICA) verileri körü körüne demixlemek ve bireysel kaynak sinyallerini çıkarmak için kullanılabilir. Bu teknik, nöronal kaynakları ayırmak için denetlenmeyen bir yöntemi temsil ettiği için HD-MEA kayıtlarındaki başak sıralama sorununu hafifletmek için büyük bir potansiyel sunmaktadır. Ayrılan kaynaklar veya IC'ler, daha sonra, tek nöron sinyallerinin tahminlerini oluşturur ve IC'ler üzerindeki eşik algılama, sıralı başaklanma sürelerini verir. Bununla birlikte, ekstraselüler nöronal kayıtların ICA gerekliliklerini ne derece karşıladığı bilinmemektedir. Bu yazıda, ICA'nın HD-MEA kayıtlarının sivri olarak sınıflandırılmasına uygulanabilirliğini değerlendiriyoruz. Yüksek zaman-zamanlı çözünürlükte kaydedilen hücre dışı sinir sinyallerinin analizi, kaydedilen verilerin tamamen doğrusal bir karışım olarak modellenemediğini ortaya koymaktadır. Sonuç olarak, ICA nöronal sinyalleri tamamen ayıramaz ve HD-MEA kayıtlarında başakta sıralama için tek başına bir yöntem olarak kullanılamaz. Simüle veri kümeleri kullanarak ICA'nın demixleme performansını değerlendirdik ve performansın nöronal yoğunluk ve başak amplitüdüne kuvvetle bağlı olduğunu bulduk. Ayrıca, ICA'nın en ciddi sınırlılıklarının üstesinden gelmek için postprocessing tekniklerinin nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz. Anahtar Kelimeler: sivri ayırma, çoklu birleştirme, çoklu elektrod. Bu çoklu boyutlu nöronal kayıtların hızlı bir şekilde şiddetlenmesini kolaylaştırmak için bu ileri işlem teknikleriyle birlikte ICA, uygulanabilir bir yöntemdir.

nevrofizyoloji araştırması sinir aktivitesinin ekstraselüler kayıtları, hücrelerarası etkileşimi incelemek ve fizyolojiyi daha iyi anlamak için desenler atmak için önemli bir araç haline gelmiştir Ve nöronal ağların bilgi işlemesi. Çok birleşimli kayıtlarda elektrotlar, çok sayıda bireysel nöronun eşzamanlı aktivitelerini izler. Analiz için, bireysel nöronların başak eğrileri daha sonra kaydedilen veriden çıkarılmalıdır; bu süreç genellikle "başak toplama" olarak adlandırılır (Lewicki, 1998). Genellikle, …

Devamını Oku »

Soutltrait, Merzouga Rallisinin 3. Aşamasından Sonra Leads

                         İki aşamalı galibiyet ve Aşama 3'te üçüncü sırada yer alan Yamaha sürücüsü Xavier DeSoultrait, 3. Aşamanın sonunda Merzouga Rallisinde liderlik yapıyor. Sahnenin ikinci yarısında kum fırtınası binicilere zor geliyor. Hero MotoSports binicisi C S Santosh 15. konumunu korurken, Sherco TVS sürücüsü Juan Pedrero genel olarak beşinci konumdadır. Hero MotoSports'tan Joaquim Rodrigues, bisiklet sıkıntılarıyla uğraşmak zorunda kaldı ve 16. sırayı …

Devamını Oku »

ABD nükleer santralindeki işçiler tünelden sonra kapak alıyor …

                                                                                                          Washington eyaletindeki Hanford, Batı yarıküredeki en kirli nükleer sitedir.     Federal yetkililer, Washington eyaletinin bir nükleer santralinde yüzlerce işçi, santralde kontamine malzeme dolu bir tünel çöktüğünde salı günü kapatılacak emri aldığını bildirdiler.                                                                       Seattle şehir merkezinin yaklaşık 170 mil (275 kilometre) güneydoğusunda bulunan Hanford Sitesi tesisindeki çalışanlar sabahın erken saatlerinde yönetim tarafından "havalandırma sağlamak" …

Devamını Oku »

Amerika gizemi X-37B uzay gemisi, iki saat sonra topraklar …

                                                   Gizemli zanaat gözlem test kuşağı gibi görünüyor                                               Dokunmatik … X-37B Orbital Test Aracı (Kaynak: ABD Hava Kuvvetleri)                                                                                                        Pic ABD Hava Kuvvetleri'nin gizemli X-37B uzay mekiği indi; inişinden sadece iki yıl sonra.                  Pazar günü Florida'daki NASA'nın Kennedy Uzay Merkezi'ndeki eski Uzay Mekiği pistine insansız zanaat indi.                  Boeing …

Devamını Oku »

VW, emisyon skandalından sonra dizel satışlarına devam ediyor

David Shepardson Reuters 4 Mayıs 2017 09:53 CET WASHINGTON – Volkswagen Group, Çarşamba günü ABD'de geçen ay dizel otomobil satmaya başladığını ve Nisan satışlarının yaklaşık% 12'sini oluşturduğunu ve bu araçlara yönelik bir işaretin tüketici talebinin olmadığını açıkladı Emisyon skandalı tarafından nemlendi. Dünyanın en büyük otomobil üreticisi, altı yıl boyunca emisyon limitlerini aşmak için gizli yazılımı kullandığını kabul eden otomobil, Eylül …

Devamını Oku »

Guatemala'nın yanardağ patlaması acele etmeden sonra sönüyor …

                                                                                                          Yangın Volkanı, 5 Mayıs 2017'de patlak veren Guatemala Şehri'nin yaklaşık 30 km güneybatısında güneybatısında, Sacatepequez adlı bölgedeki Alotenango belediyesinden görülüyor.     Yetkililer, Guatemala'nın başkenti yakınlarında bir yanardağda meydana gelen aktivitenin, normalde sıcak bir kül havaya çıkmasıyla 300 kişinin boşaltıldıktan sonra bir gün olduğunu belirttiler. Guatemala,                                                                       Sözde Yangın Volcanı, Guatemala Şehri'nden 35 kilometre (22 …

Devamını Oku »

Yasaklandıktan sonra Türk Hava Yolları VI'ya dizüstü bilgisayarlar sunacak …

                                                                                                          Türk Hava Yolları, ABD ve İngiltere'ye giden business class yolcularına dizüstü bilgisayar sunacak      Türk Hava Yolları Cumartesi günü, Britanya ve ABD'nin büyük elektronik cihazları belirli ülkelerdeki uçuşların kabininden çıktıktan sonra iş amaçlı gezginlere dizüstü bilgisayar sunacaklarını söyledi.                                                                       Washington, yedi Ortadoğu ülkesinde ve Türkiye'de 10 havalimanından Amerika Birleşik Devletleri'ne yapılan doğrudan uçuşlarda …

Devamını Oku »

Üç bilgisayar bilimcisi, matematikçileri onlarca yıldır uğraştıran bir bilmece olarak bildiğimiz, Boolean Pisagor üçleme sorusunun cevabını içeren ve bir süper bilgisayar kullanır 200 terabaytlık bir dosya oluşturdu. Bu en büyük matematik ispata denk geliyor. Süper bilgisayar problemi 2 günde çözdü ve 200 terabayt yer tuttu. Yanlış duymadınız, 200 terabayt. Matematikçileri onlarca yıldır uğraştıran bilgisayar destekli çözümün tuttuğu miktarları miktar. Boolean Pisagor üçleme problemi bu bilgisayarla çözüldü. Birinci okunmamış Mesaja git Bu yazıyı sadece içeriğine tıkla. Bilgisayar destekli matematik ispatları konusunda kırılan 200 terabaytlık dosya rekorunun önceki sahibi sadece 13 gigabayt yer tutmalarıdu. İspatın arkında problem Kaliforniya Üniversitesi, San Diego'da matematikçi olarak çalışan ve bundan önceki sahibi olan Ronald Graham, problemlerin çözümünde bilgisayarların sıkça insanlara yardım ettiğini söylüyor. Hatta problemi çözebilen herkese 100 ABD doları teklif etmiş. Daha önce bahsedildiği gibi, Boolean Pisagor üçlemesi olarak bilinen matematik sorusunun çözümü 200 terabaytlık bir yer kaplıyor. Onun bir pozitif tamsayı kırmızı ya da mavi renkle işaretleniyor ve Pisagor Üçlüsü olarak bilinen a, b ve c tamsayılarının bir kombinasyonunu oluşturuyor. Böylelikle 2 + b 2 = c 2 eşitliğinde üç tamsayının hiç biri aynı renkte olmuyor. Bilgisayar çalışma zamanı ] Farklı kombinasyonlarda, çoklu yöntemlerin hepsi, hepsi birden çok yöntem varsa da, bilim insanları. Kendi avantajları için kullanmış ve bilgisayarın yapımında kontrollerin sayısını düşürmüş. İki Gün ve 800 Adet paralel olarak işlem gören, Teksas Üniversitesi'ndeki Stampede süper bilgisayararı 200 terabaytlık veriyi oluşturdu. Meşhur Boolean üçleme problemini çözmüşse de, rekor kıran dosyada hâlâ neden renk şemasının olasılığı hakkında bir şey açıklama bulunmuyor. İspata göre tamsayıları çok şekilde renklendirmek mümkün , Sadece sadece 7.824 sayısına kadar olabileceği belirtiliyor. Bundan sonra renklendirme mümkün olmuyor. Neden 7.825'te bir kesim noktası var? Kaynak: futurism.com

Araştırma ekibinin bulguları Kaynak

Devamını Oku »

Kalsinörin, daha sonra görüşür …

Gerekçe: Pulmoner aspergeilloz, bağışıklık sisteminde bozulmuş konakçıya öldürücü bir kalıp enfeksiyonudur. Enfeksiyonun başlangıçtaki kontrolünü ve bunun bağışıklığı baskılanmış konukçuda nasıl değiştirildiğini anlamak, pulmoner aspergilloz patogenezinin anlaşılmasının ana hedefidir. Amaçlar: İnsan makrofaj enfeksiyonunun sonucunu Aspergillus fumigatus ve bunların transplant alıcılarında kalsineurin inhibitörü immunosupresanlar üzerinde nasıl değiştirildiğini göstermiştir. Yöntemler: A ile insan makrofaj enfeksiyonunun sonucunu tanımladık. Fumigatus yanı sıra tek hücreli floresan …

Devamını Oku »

Öğrenciler De 'Tükenir' Büşra ATILGAN Tükenmişlik sendromu kavramı, birkaç yıl önce hayatımıza girdi ancak hızla yayıldı. Kişinin kendini 'tüketmesi' anlamına gelen bu kavramı, günlük tempo, yaşanılan olaylar da tetikliyor. Üstelik yetişkin insanlar kadar yoğun ve vaktinde koşturmacası. Peki, sendromla nasıl başlıyor? Öğrenciler yapabilir mi? Yanıtlar, Türk Psikologlar Derneği İstanbul Şube Başkan Yardımcısı Klinik Psikolog Dr. Serap Altekin'den. Günlük stres, iş temposu, okul ve Öğrencilik hayatı derken, kendimizi hep duygusal, hem fiziksel hem de zihinsel açıdan çok fazla yoruyoruz. Öğrenciler; Ders yoğunluğu, sınav stresi, arkadaşları veren rendin a sıra bir de aile basketyle baş etmeye çalışıyor. Bu sıkıntılar kişiyi tükenmişlik sendromuna sürükleyebiliyor. Serap Altekin şöyle diyor: Tükenmişlik sendromu, kişiyi bedensel ve ruhsal açılardan zorlayan hayat olaylarına veya yaşam koşullarına uzun süre maruz kalınması sonucu ortaya çıkan ruhsal, zihinsel, fiziksel bir yıpranma ve Güçsüzleştirme hali. Kişinin uzun süre yorucu ve yıpratıcı bir tempoyla çalışması, yeterince dinlenmeden efor sarf etmesi, rekabetçi bir ortamda performans ve başarı odaklı taleples meşgul olması, bir süre sonra çöküntü ve tükenmişlik getiriyor. Gücümüzün, enerjimizin ve motivasyonumuzun değişkenlikler sergilemesi son derece doğal. Tükenmişlik sendromu tedbiri alabilir bir durum; Onu, altyapısını, nedenlerini ve temel unsurlarını anlamak, önlemek noktasında yardımcı oluyor. Profesyonel atletler, "Susamadan su içmek gerekir. BAŞKALARIYLA KIYASLAMAYIN YGS, LYS, TEOG, vizeler, finaller ve bunlara günlük dersler de eklenince öğrenciler çok yoğun bir Çalışma temposundan geçiyor. Bütün bunlar, riske girmeden tükenmek sendromu. Çünkü öğrenciler bu süreçlerde, bir rekabet ortamında başarı, puan, performans ve sıralama odaklı yüksek standartlara karşı karşıya kalıyor. Aile ve toplum beklentileri ile daha da artıyor ve yıpratıcılık hızlanıyor. Bir kez daha sağlıklı bir davranış. Herkesin performansını ve başarısını kendi koşullarını ölçmek, kendisini mümkün olduğunca başkalarıyla kıyaslamaması koruyucu oluyor. Öğrencinin, "Geçen seneye göre bu yıl neler öğrendim, geçen aya kıyasla bu ay ne kadar hızlandım, düne göre bugün hangi konularda daha iyiyim?" Gibi gelişimini kendi içerisinde daha fazla sağlıklı. Bir de en önemlisi, almadı ya da sınav derecesiyle kendini özdeşleştirmemek. Değil, puan, sıralama; Ibaret sadece bir kere yapmak. ACABA TÜKENİYOR MÜYÜK? Tükenmişliğe neden emin olmalı, henüz erişmek için gibi insanlara yet gibi davranıyorlar mı? Öğrencilerde de benzer. Ama ders programı, ek derslerin, etüt saatlerinin yoğunluğu, daha fazla yükseğe çıkarılmış hedef ve beklentiler, rekabet ortamı, burs gibi birçok etken öğrencilerin üzerindeki baskıyı ve yıpranma payını da maksimuma çıkarıyor. Buna monotonluk, yalnızlık ve sosyal desteğin yetersizliği gibi yeni bir boyut eklenince risk artıyor. Yeterince mola vermemek, dinlenmemek, sağlıklı ve dengeli beslenmemek de riski arttırmak da önemli bir faktör. Kısa vadede yaşanan performans, başarı, puan, derece, prestij, statü, takdir ve onay gibi tatmin kaynakları ve bu anlam anlamı yitirmiş oluyor. [19459107] FİZİKSEL BELİRTİLER: Enerjisizlik, kronik yorgunluk, güçsüzlük, baş, mide, bel ve felsefe ZİHİNSEL BELİRTİLER: Umutsuzluk, ZİHİNSEL BELİRTİLER: Umutsuzluk, DUYGUSAL BELİRTİLER: DUYGUSAL BELİRTİLER: Bu yazı, ] Ağırlıklı olarak stres ve depresyon belirtilerine benzerlik gösteriyor. [19459106] Kimler, risk altında mı? Klinik Psikolog Dr. Serap Altekin'e göre, durum, olay ve iş koşullarının özellikleri kadar, insanın kendi kişiliğiyle ilgili unsurlar da tükenmişlik sendromunun altyapısını oluşturuyor. Dr. Altekin, daha fazla risk taşıyan kişileri şöyle sıralıyor: * Yüksek idealler taşıyanlar, * Mükemmeliyetçiler, * 'Hayır' demekte zorlananlar, * Yüksek sorumluluk ve çarpma iyi görev bilincindekiler, * Diğer insanların beklentilerini ve * Kendini suçlamaya ve yargılamaya eğilimliler, * Kolayca yetersizlik duygusuna kapılabilenler, * Sosyal destek sistemleri az olanlar.

SENDROMUNUZLA NASIL BAŞ EDEBİLİRSİNİZ ] – Yemek ve uyku düzenleyin dikkat edin. – Mizaha vakit ayırın. – Daha fazla hareket edin, spor yapın. – Hobi edinin. – İnsan teması her zaman şifa ve güç kaynağıdır, arkadaş ve dostlarınızla buluşun, konuşun, paylaşın. – Sadece koşullar elveriyorsa yaratıcılık ve esnekliğe izin verin. – İhtiyaç duyduğunuzda yardım ve destek istemekten çekinmeyin. – Koşullarınız …

Devamını Oku »

S-palmitoilasyon (S-asilasyon), sistein kalıntılarının ortaya çıkmış bir dinamik post-translasyonel modifikasyonudur. S-palmitoylation (S-acylation) Proteinler içinde. Protein S-palmitoilasyon için güncel tahliller, bir afinite kolu (asil-değişimi) ile daha sonra etiketlenebilen bir serbest sistein sülfhidril ortaya çıkarmak için S-palmitoil gruplarının in vivo etiketleme veya kimyasal bölünmesini içerir. Asil-değiştirme kimyası kullanılarak protein S-palmitoilasyon için tahliller, bu nedenle, spesifik olmayan bulgulamayı önlemek için tipik olarak N-etilmaleimid kullanan S-palmitoillenmiş sisteinlerin bloke edilmesini gerektirir. Bu, basamaklar arasındaki reaktifleri çıkarmak için birden fazla çökeltiye dayalı temizleme basamağını gerektirir; bu genellikle değişken örnek kaybına, sinyal veya protein agregasyonunda azalmaya yol açar. Bunlar, bu tahlillerin hassasiyetini, güvenilirliğini ve doğruluğunu azaltmak için bir araya getirilir ve ayrıca gerçekleştirilmesi önemli bir zaman gerektirir. Bu yağış adımlarını, sulu bir Diels-Alder 4 + 2 siklo-ilave reaksiyonunda 2,3-dimetil-l, 3-bütadien ile N-etilmaleimidin kimyasal olarak süpürmesi ile ikame ederek hassasiyeti ve doğruluğu arttırırken, S-asilasyon, palmitoilasyon, S-palmitoilasyon, asil biyotin değişimi, asil-RAC, biyotin anahtarı, maleimid , N-etilmaleimid, sistein, tiol, ABE, Diels-Alder

Devamını Oku »

Yaklaşık 50 kişi, Teksas'tan sonra hastanelere götürüldü …

                                     Doğu Teksas'ın Kanton kentinde bir kasırga süpürüldükten sonra yaklaşık 50 kişi hastaneye kaldırıldı.                                                                       ETMC Bölgesel Heathcare Sistemleri'nin bir sözcüsü, bölgedeki hastanelerinin şu ana kadar kritik bir durumu bulunan 47 hasta aldığını açıkladı. Sözcüsü Rebecca Berkley, Cumartesi akşamı fırtınadan sonra yolda birkaç hastanın bir avuç bulunduğunu söyledi. Ulusal Hava Durumu Servisi meteorologlarından Mark Fox, Dallas'tan yaklaşık 80 kilometre …

Devamını Oku »

Duştan Sonra Saçlarının Kabarmaması

Saç kabarorn birçok nedeni olmaktadır. Saçlarda kuruluk, cansızlık ve kırıklar oluşur. Özellikle saçların aşırı ısı kullanımı saçların daha sonra kabarmasına. Bunun yanı sıra, nemli havalar saçların kabartmasına da problemdir. Bu nedenlerden dolayı saçlarınıza istediğiniz gibi şekil veremeyebilir ve düzene sokamayabilirsiniz. Saç kabarmasının önüne geçilirken saçlarınıza doğal yollarla birlikte bakmak için. Saçlara uygulanan bilgilerle saçları yumuşamasına yardımcı olurabilirsiniz. Saçımı duştan sonra …

Devamını Oku »

Peugeot, satış teşviki çok popüler olduktan sonra üst düzey Alman yetkilileri ateşlediğini söyledi

Peugeot'un 208 leasing teklifi geçmek için çok iyi oldu. FRANKFURT – PSA Group, binlerce Peugeot 208 otomobilinin liste fiyatının% 40'ından fazlasının satıldığı bir satış kampanyası sonrasında Almanya'daki en üst düzey yöneticilerin üçünü görevden aldı Otomotiv Haberleri Avrupa kardeş yayın Automobilwoche bildirdi. Sixt Leasing ve İnternet sağlayıcısı 1 & 1 ile olan işbirliğinde Peugeot, 208 subcompact'ini 99 avro gibi kısa bir …

Devamını Oku »

Bir KMY Modeli A'dan Sonra Değişir …

J Clin Endocrinol Metab. 2014 Kasım; 99 (11): 4094-4100. Genel Dahiliye Bölümü (B.M.), San Francisco Veterans Affairs Tıp Merkezi, San Francisco, California 94121; Endokrinoloji Anabilim Dalı (B.M.), Epidemiyoloji ve Biyoistatistik Bölümü (E.V., A.V.S., D.C.B., D.M.B.), University of California, San Francisco, San Francisco, California 94117'de Tıp Fakültesi (B.M., D.C.B.); Kemik Metabolizmasının Akademik Birimi (R.E.), İnsan Metabolizma Departmanı, Sheffield Üniversitesi, Sheffield S10 …

Devamını Oku »

2. şirket, ölümcül renklerden sonra petrol, gaz kuyuları kapatır …

                                     İkinci bir petrol şirketi, araştırmacıların kuyunun sebebinin olup olmadığını söylememesine rağmen Colorado'daki bir gaz kuyusu yakınlarında ölümcül bir patlama sonrasında kuyu kapatma ve inceleme kararı aldığını söyledi.                                                                                Great Western Oil & Gas Co, kuyularının 61'ini kontrol edeceğini ve herkesi Perşembe günü kapatılacağını umduğunu söyledi. Kuyuların nerede olduğunu söylemedi ve bir şirket sözcüsü Cuma görüşünü talep ederek hemen …

Devamını Oku »

Dünyanız Bir İlişki Gördükten Sonra Endişelenmiyor …

Twenty20 / @batoshka Şu anda sahneye çıkıyorsunuz . Üzüntü ve kayıtsızlık korkunç bir karışımı. Umarım herhangi bir dakika uyandıracaksınız ve bu korkunç, affedici olmayan bir rüyadır. Ama evet, dalga geçiyorsun. Ve her şey yolunda. Çılgınlaşma gerekli bir aşama olabilir. Devam edin, bir Netflix aşırıya kaçın ve tekrar tekrar aynı ağlayan şarkıyı dinleyin. Bir dakika sonra dünyada olduğu gibi hissetmenize izin …

Devamını Oku »

19F-NMR, Mo'nin Rolünü ortaya çıkarır … β-laktamaz antibiyotiklerine direncin en önemli mekanizmalarından biri olan β-laktamazlar tarafından katalizlenen hidroliz. [1] Her ne kadar β-laktamazlar, Bir nükleofilik serin (sınıf A, C ve D), β-laktamlara dirençli olarak iyi bilinen roller taşımaktadır; B sınıfı Zn II'ye bağımlı metallo-β-laktamazlar (MBL'ler) daha yakın zamanda ortaya çıkmıştır Önemli bir klinik problemdir (Şekil ). A sınıfı β-laktamazların (örn klavulanik asit) klinik olarak yararlı önleyicileri yaygın olarak kullanılmaktadır ve avibactam'ın yakın zamanda geniş spektrumlu bir serin β-laktamaz inhibitörü olduğu bildirilmiştir; Bununla birlikte, MBL'ler için böyle bir inhibitör mevcut değildir.4 A) Metalo-β-laktamazlar (MBL'ler) için anahat mekanizması. B'de "açık" (PDB ID: 2FHX) 8a ve C "kapalı" (PDB ID: 4BP0) 8b konformasyonları … ] São Paulo MBL-1 (SPM-1) ilk olarak β-laktam dirençli Pseudomonas aeruginosa 5 ve SPM-1 üreten P'de tanımlandı. Aeruginosa Brezilya hastanelerinde endemiktir.6 Avrupa, Asya ve Kuzey Amerika'da SPM-1 aracılı dirençle ilgili yakın tarihli raporlar, küresel yayılımını ortaya koymaktadır.7 SPM-1, inhibisyon perspektifinden dolayı belirli bir zorluktur; Substrat özgüllüğü (penisilin, sefalosporin ve karbapenem hidrolizi katalizörü) hem B1 hem de B2 alt aileye ait MBL'lere karakteristik özelliklere sahiptir (Şekil 1, Destekleyici Bilgi). 8 SPM-1, di-Zn II iyon gereksinimi ve (mevcut kanıtlara dayalı olarak) kinetiğine göre 9 SPM-1 olağandışı ikinci küre kalıntılarına 10 sahiptir ve mobil aktif bölge bölgelerine göre B1 MBL'ler arasında benzersizdir; SPM-1, B2 MBL'lerin karakteristik özelliklerini oluşturan genişletilmiş bir "α3 bölgesi" (kalıntılar 223-241, BBL numaralandırma) ve nispeten kısa bir L3 döngüsüne (kalıntılar 61-66, BBL numaralandırma) sahiptir.8a SPM-1'in yapıları yoktur Substratlar / önleyiciler ile kompleksleşmiş halde, α3 bölgesinin aktif bölgeye göre open8a ve closed8b konformasyonlar benimsediği yapılar bildirilmiştir (Şekil B, C). İçerdiği Duyarlılık, rezonans eksikliği ve NMR cihazlarındaki ilerlemeler ve prob tasarımı, protein gözlemleme 19 F-NMR (PrOF NMR) konformasyonel değişiklikler ve protein-ligand etkileşimleri incelenirken artan bir yarar sağlar. , Verimli bir şekilde flor etiketleri (Şekil S2A) .8b, 12 tanıtmak için 3-bromo-1,1,1-trifloroaseton (BTFA) tarafından sistein alkilasyon kullanarak MBL dinamikleri incelemek için PrOF NMR kullanımı hakkında rapor Burada, biz PrOF NMR çalışmaları Göreceli imp hakkında bilgi veren SPM-1 Farklı sınıflarda MBL substratlarının / inhibitörlerinin bağlanmasında L3 döngüsü ve α3 bölgesinin ortansı. Önemlisi, MBL katalizörünün hidrolize β-amino asit ürünlerinin, L3 döngüsünü içeren bir süreçte SPM-1'e bağlanabileceğini ortaya koymaktadır. L3 döngüsünde (Y58) ve α3 bölgesindeki (F151) rezidüler 19 F ile değiştirme ve etiketleme için seçilmiştir (Şekil S2B). İlk çalışmada biz Y152; 8b'yi etiketledik, ancak daha ileri çalışmalar için F151'i seçtik, çünkü SPM-1 kristal yapılarının analizi8 F151 yan zincirinin hareketli olduğunu ve Tyr152'ninkinden daha aktif alan çinko iyonlarına yakın projeleri ima ettiğini gösterir (Şekil S3 ). BTFA (sırasıyla Y58C * ve F151C *) kullanılarak Y58C ve F151C SPM-1 varyantlarının selektif etiketlenmesi intakt protein ve tripsin-digest kütle spektrometrisi ile doğrulanmıştır (Şekil S4-11). Dikkat çekici olarak, SPM-1'deki doğal olarak var olan sistein (Cys221), BTF ile reaksiyon göstermedi, muhtemelen Cys221'in karbamidometilasyonu ile kanıtlandığı üzere Zn II'yi kenetlediği için Y58C * ve F151C * 'nin MS analizlerinde Cys58 ve Cys151 değil (Şekiller S8-11). Yabani tip (wt) SPM-1, Y58C * ve F151C * 'nin dairesel dikroizm spektrumları13 benzerdi (Şekil S12), dolayısıyla Y58C'nin kristalografik analizleri ile desteklenen benzer toplam kıvrımları ima eder (Şekil S13,14 ve Tablo S1). Kinetik analizler14 (Şekil S15), CH 3 COCF 3 etiketinin eklenmesinin substrat afinitesini büyük ölçüde değiştirmediğini, yani benzer wt SPM-1 ve her ikisi de etiketli varyant ile meropen için M değerleri elde edildi. k 'nin 2.5 kat azalması, Her iki SPM-1 * varyantı ile meropenem için kedi muhtemelen enzim-ara komplekslerinde modifiye edilmiş kalıntıyı içeren etkileşimleri yansıtmaktadır. Kombine biyofiziksel ve kinetik çalışmalar, Y58C * ve F151C * 'nin özelliklerinin, PrOF NMR çalışmalarını haklı çıkarmak için ağırlıkça SPM-1'e yeterince benzediğini ortaya koymuştur. BTFA'nın protein alkilasyonuyla ilgili önceki çalışmalarla birlikte bu sonuçlar, BTFA'nın, translasyon sonrası sistein alkilasyonu yoluyla 19 F etiketlerinin etkili bir şekilde verilmesi için kullanışlı olduğunu ortaya koymaktadır. 19 F-NMR spektrumları, -83.15 ppm'de (Y58C *) ve -84.75 ppm'de (F151C *; Şekil S16) ana protein gözlem tepeleri ortaya çıkardı ve böylece varyantların işaretlenmiş halkaları / bölgeleri ağırlıklı olarak tek bir konformasyonda mevcut olduğunu gösterdi Veya daha muhtemel olarak, etiketli kalıntıların NMR kaydırma zaman ölçeğine göre hızla ilerlediğini görürsünüz. F151C * varyantı, muhtemelen konformasyonel hareketi yansıtan -84.75 ppm'de daha keskin zirvelerin her iki tarafında da geniş sinyaller verdi; Bununla birlikte, değişken sıcaklık çalışmalarında (277 K – 310 K) sinyalin çizgi genişliğinde ve yoğunluğunda değişiklikler gözlemedik. Kristalografik kanıtlarla uyumlu olarak, solvent izotop değişim çalışmaları (Şekil S17) maruz kalan α3 bölgesinde bulunan F151C * 'nin, daha az maruz kalan L3 döngüsünde bulunan Y58C *' ye daha kolay çözülebilir olduğunu ortaya koymuştur. Daha sonra temsili MBL ligandlarının Y58C * ve F151C * SPM-1'e bağlanmasını araştırmak için PrOF NMR (Şekil S18) kullandık (Tablo S2, K için Tablo S3'e bakınız) D değerleri). Başlangıçta, ligand bağlanmasını araştırmak için SPM-1 * varyantlarının kullanımını doğrulamak için rapor edilen MBL inhibitörlerini test ettik. Çinko kenetleme maddesi 1,10- o -fenantrolin ile hem Y58C * (Şekil A) hem de F151C * (Şekil 19459005) B) için yeni NMR tepeleri gözlemlendi. Bu zirveler, çözeltide 1,10- ile tahmin edilen Zn II ekstraksiyonuyla tutarlı olan apo -SPM-1 * spektrumunda gözlemlenenlerle aynıdır. -fenantrolin; 1,10- o -fenantrolinin kendisinin apo [Madde -Y58C * (Şekil 19459005) A ve Şekiller S19,20'ye bağlandığı gözlemlenmemiştir. Bu sonuçlar, metalo-enzim inhibisyon çalışmaları yoluyla her zaman kolayca erişilemeyen çözelti ve / veya protein içindeki metal şelasyon / bağlanmanın tespit edilmesinde PrOF NMR'nin faydasını ortaya koymaktadır. Rodanin ML302 ve tioenol ML302F ile, sırasıyla, Y58C * ve-F151C * için -83.75 ppm ve -84.40 ppm'de 16 yeni zirve gözlendi (Şekil S21). Bu gözlemler, kuluçka koşulları altında tioenol ML302F'yi vermek üzere ML302'nin hidrolizi ile tutarlıdır.17 -1 MBH'leri inhibe eden, ancak SPM-1'i (IC505) inhibe eden -Captopril,> 500 μ m 18 ve alt sınıf B2 MBL'leri 19, önemli değil SPM-1 * varyantlarının herhangi biri için 19 F spektrumundaki değişiklikler (Şekil S22). SPM-1 * 'e bağlanan inhibitörün PrOF NMR monitörizasyonu. 19 1,10- -fenantrolinin A) Y58C * SPM-1 ve B) F151C * SPM-1 ile etkileşimlerinin F-NMR spektrumları. 19 … 'nin F-NMR spektrumu. İzokinoller, geniş spektrumlu MBL inhibitörleri, 13,14, ancak bağlayıcılarıdır Modu bilinmiyor. İzokinolin ( 1 ) 13, 14'ün Y58C * ile titre edildiğinde, ara değişimde bir sistemin tipik olan önemli çizgi genişlemesi gözlemlendi. ML302F17'nin Y58C * ve 1'i içeren bir numuneye eklenmesi, ML302F'ye bağlı kompleksin zirve karakteristik özelliğinin ortaya çıkmasına ve Y58C * zirvesine göre 1.1 ppm ile deshield edilen yeni bir zirvesinin ortaya çıkmasına yol açtı (Şekil C). F151C * ile, 1 genişleme ve kimyasal kayma değişiklikleri indükledi (Şekil D). Böylece, 1 'nın bağlanması hem α3 hem de L3 bölgelerini etkiler (Şekil S22-24). Bununla birlikte, ilginç bir şekilde sonuçlar, 1'in aktif saha çinko iyonlarına bağlandığı bilinen ML302F'nin varlığında SPM-1'e bağlandığını ima etmektedir.17 Bu gözlem ile birlikte ]Çizginin genişlemesi ile (Şekil 19459005) gösterildiği gibi apo -Y58C * 'ya bağlanır; sonuçlar, SPM-1'e benzeri görülmemiş şekilde bağlanıp eklenmediğini ima eder Sonra, sınıf A, C'yi ve bazı Dp-laktamazları inhibe eden avibactam ile örneklenen zayıf SPM-1 inhibitörlerinin bağlanmasını izlemek için PrOF NMR'nin yararını test ettik, 3b, 4c'ye sahip ancak çoğu MBL için afinitesi düşüktür.4b Avibactam ve Y58C * ile açık bir kimyasal kayma değişikliği gözlemlendi, bu nedenle avibactam bağlanmasının L3 bölgesinde ancak α3 bölgesindeki değişiklikleri indüklediğini gösterdi (Şekil S25, 26). Y58C * ile muhtemelen orijinal protein zirvesine geri dönüş, muhtemelen SPM-1.4b ile katalize edilen avıbactamın yavaş hidrolizinin bir sonucu olarak gözlendi Reaksiyona giren solüsyona yeni avibactam ilavesi, tepeyi orijinal olarak avibactam'dan doğana doğru kaydırdı Sonra, β-laktam substratlarının [a carbapenem (meropenem), a penicillin (piperacillin), and mechanism‐based inhibitors of class A β‐lactamases (tazobactam and clavulanic acid)] SPM-1 * varyantlarına eklenmesini araştırdık. Onların SPM-1 * 'e ilavesi, Y58C * için çizgi genişletme ve kimyasal değişim değişikliklerine neden olurken, F151C * (Şekil) için 825 meropenem muamelesi (400 μ m ) (saptama limitleri dahilinde değil) * Y58C * 40 μ m ), 0,2 ppm 19 F kaydırmasına (-83.15 ppm'den -82.95 ppm'ye) yol açtı ve böylece hızlı değişim (Şekil 19459005) A, E gösterildi. Zaman-kurs analizi 12 saat boyunca kararlı olan spektrumları ortaya çıkarmıştır (Şekil 19459005). Bu durumda yeni zirveye muhtemelen bir enzim ürünü kompleksini yansıttığını düşündürmektedir (Şekil S27-31). Piperacillin (400 μ m ) ile 0.4 ppm'lik bir kayma da gözlenmiştir (Şekil B, F). Bununla birlikte, meropenem'in aksine, zaman-gidiş analizi, ilave çizgi genişlemesi ve -82.75 ppm'den -82.57 ppm'e (Şekil D ve Şekil S32) ürün karmaşık zirvesine göre 0.18 ppm'lik bir başka kimyasal kayma ortaya koymuştur; bu nedenle, Yeni bir SPM-1 bağlanma türünün üretilmesi. PrOF NMR ile analiz edildiği gibi (hidrolize edilmiş) β-laktamların SPM-1 * varyantlarıyla olan etkileşimleri. A) meropenem ve B) piperasilinin Y58C * SPM-1 ile titrasyonu, L3 bölgesi ile etkileşimleri ortaya koymaktadır. Önceki çalışma, piperacillin hidroliz ürününün penisilin-bağlayıcı proteinlere, "epimerize" protein ile bağlanabileceğini ortaya koydu. Başlangıçta oluşan (5 (19459020)] – penisiloik asite (PA) tercih edilene göre ürün bağlanmasıdır. Böylece, 1 'yı kullandık.' H NMR'den Piperasilinin zaman bağımlı SPM-1 ile katalize edilen hidrolizini değerlendirir (Şekil S33). Sonuçlar SPM-1'in piperasilin hidrolizini katalize ederek muhtemelen bir enzim haricinde (5 – ) – PA verecek şekilde nispeten yavaş epimerize olan (5 ) – PA'yi vermesi için katalizlendiğini ortaya koymaktadır Katalizli yol. (5 (19459019) S ) -PA ve SPM-1'e bağlanmayı araştırmak için, Bacillus cereus [BcIIMBL14PADahasonrasaflaştırılmıştırSonuçtakiY58C*karışımınailaveedilenpiperasilinzamanperiyodunda12saatsonragözlemlendiğigibi-8257ppm'debirzirveyeyolaçan(PA52C*'ye)(Şekil) 1 H ve su LOGSY analizleri, her ikisinin de (5 (19459020) PA ve (5A) SPM-1'e bağlanmasını ortaya çıkarmıştır (Şekil S34). 19 Hidrolize piperacillin ile etkileşen Y58C * SPM-1'in F-NMR spektrumları. Piperasilin ve hidrolize ürünlerin yapıları [5(19459019)R) – PA ve 5 (19459020] – PA] yapıları gösterilmektedir. Deney karışımları: 40 μ m Y58C * SPM-1

Daha sonra PrOF NMR'yi, SPM-1 substratları olan A sınıfı SBL inhibitörleri klavulanik asit ve tazobaktam ile SPM-1.89 Hat büyütme ve -83.15'den -83.02 ve -82.98 ppm'e geçiş, 19 F Y58C'de Sırasıyla tazobaktam ve klavulanik asit tayfları; 12 saat sonra başka hiçbir önemli değişiklik görülmedi. F151C * için böyle bir etki görülmedi (Şekil S35-39). Klavulanik asit ve tazobaktamın kompleks parçalanmaya uğradığı eğilimi21 …

Devamını Oku »

Ford'un zorlu 1. Çeyrekten sonra kârı artırmak için Expedition, Navigator'a ihtiyacı var

Bedava Fiyat Teklifi bir Yerel Bayi No Obligation, Hızlı ve Basit Ücretsiz Yeni Araç Alıntı Değiştirme Arabası Marka Seç Acura Alfa Romeo Aston Martin Audi Bentley BMW Buick Cadillac Chevrolet Chrysler Dodge Ferrari FIAT Ford Genesis GMC Honda Hyundai Infiniti Jaguar Jeep Kia Lamborghini Land Rover Lexus Lincoln Lotus Maserati Mazda McLaren Mercedes-Benz MINI Mitsubishi Nissan Porsche Ram Rolls-Royce Filiz …

Devamını Oku »

Takata hisse ticareti iflas planını bildirdikten sonra askıya alındı ​​

TOKYO – Japonya'nın Takata Corp hisselerinin ticareti, bir gazetenin yayınladığı rapordan sonra, zor durumda olan otomobil tedarikçisinin tüm işlemleri bir yeni oluşturulan şirkete satarak, iflas koruması için başvuruda bulunmayı düşündüğünü bildirmesi üzerine askıya aldı. Nikkei iş günlüğüne göre plan, Çin'in Ningbo Joyson Electronic Corp. birimi olan ABD merkezli Key Safety Systems'i, yaklaşık 200 milyar yen (1.8 milyar $ harcama) dönüş …

Devamını Oku »

ABD araç tamir masrafları, iki yıl yattıktan sonra 2016'da% 2,7 arttı

Fotoğraf kredi: CarMD | BLOOMBERG        ABD'de parça ve işçilik de dahil olmak üzere bir araç onarımının ortalama maliyeti, 2016 yılında yüzde 2,7 artarak 398 dolara çıktı. CarMD, 2017 Araç Sağlık İndeksinde Salı . Artış, ortalama maliyetin yattığı iki yılın ardından geldi. Asansör, işçilik maliyetlerinde yüzde 4.7 artış ve ortalama parça giderlerinde yüzde 1.4 artış sağladı. CarMD'nin bir sözcüsü olan …

Devamını Oku »

Mink Mingle Sevdiğim birisi derinden beni çağırıyor. Kalbi kırıldığını söylüyor, bana geri kazanmaya çalıştığını söylüyor, ona ihtiyacı olan şeyi, nasıl güvenini kazanabileceğini, doğru şeyleri yapmak için neler yapabileceğini soruyor. Dinliyorum. Ona değerini hatırlatırım. Ve sonra sinirlenirim. Çünkü yardım edemem ama neden bu adamın bir milyon ve bir şeyi denemediğini merak ediyorum. Neden çiçeklerini almadı? Her sabah ve her gece ve hatta gün boyunca onu neden düşünüyor olduğunu göstermek için neden ona mesaj atmadı? Neden ona bir mektup yazmadığı ya da onu yemeğe götürmediği ya da en sevdiği şeker çubuğunu alıp çantasına sokmadığı ya da bir rölyefle rengarenk bir battaniye üzerinde sergileneceğini sorup durmadığını sordu. yıldızlar? Yoksa onu tekrar tekrar hatırlattı, nasıl berbat ettiğini ve onu kaybetmek istemediğini mi? Dinlediğimde, onu geri getirmek için sahip olabileceği bir milyon ve bir fırsattan geçtim, onun endişeli zihnini hafiflettiği söylenebilecek tüm sözleri, ona göstermek için yapabileceği tüm küçük şeyler Önemli olan, katlanarak, ona. Ağlıyor Diye bağırıyor bağırıyor. Neye ihtiyacı olduğunu söyledi, bana neden korktuğunu, nasıl incildiğini, kalbinin güvensizlikten ve kırılmasından nasıl acı çektiğini ve hiçbir şey yapmadığını söylediğini söyledi. Ona sadece ona ihtiyacı olan şeyi gösterebileceğini, kendisini sevmenin yollarını söyleyebileceğini istiyor olduğunu söyledi. Yardım edemem ama bunun yanlış olduğunu düşünüyorum. Çünkü bu adama onu nasıl seveceğini söylemek zorunda kalmamalı, işleri doğru yapmalı. Ona nasıl zarar verdiğini görmesine izin vermemeli, kırık olanı nasıl düzeltebileceğini ona göstermeliydi. Hiçbir şeyi açıklamak zorunda kalmamalı, çünkü onu sevilen biri olarak zaten biliyor olmalıydı. Sözünü dinlerken, kendi ilişkilerimi düşünüyorum. İlk aşkım olduğu için bana nasıl bakacağından emin olmadığı için ya da çok duygusal olduğum için, güvenime ne kazandığından emin olmadığı için ya da benim güvenimi kazandığımdan emin olmadığına inandığım insanlardan bahsediyorum. Hassas ve inatçı olduğum için sevmeyi zorladım. Mazeretlerim var. Aklıma getirdim. Sorun olduğunu düşündüm. Ben, çok fazla kaleyi seven, o adamların beni nasıl seveceğini bilmediğini sanıyordum. Fakat birileri seni seviyorsa seni seveceklerdir. İhtiyacınız olan her şekilde sizi seveceklerdir. Nasıl yapacaklarını bildikleri her şekilde seveceklerdir. Seni sevecekler ve bu sevgiyi defalarca kanıtlayacaklar, çünkü seni kaybetmek istemiyorlar. Gerçek aşk bu. Hepimiz kusuruz, ama birisi gerçekten mahvederse, onu doğru yapmak için her şeyi yapıyor olacaklar. Beklentileri çok yüksek tuttuğunuza inanmak için sizi suçlamaya çalışmazlar. Senaryoyu ters çevirmezler ve sadece zaman çizelgesinde onları bağışlamadığınız için yanıltıcı olanınız gibi davranırlar. Onları kol uzunluğunda tutmak için kendinizi kötü hissettirmezler, çünkü hala inciniyorsunuz. İhtiyacınız olduğunu düşündükleri ya da ne istediklerini algılarlarıyla eşleşmediğinden, ihtiyacınız olan şeyi görmezden gelmeyeceklerdir. Sorunlar olduğunda bir arka koltuk almayacaklar ve onlarla nasıl başa çıkılacağına dair ipucu olmayacak. Bakın, biri sizi sevdiğinde ne yapılacağı söylenemez. Nasýl bakým, nasýl hazineden geçirileceði, kayıp zamanın veya bencil eylemlerin telafi edileceği konularında söylenecekleri yoktur. Seni öpmek, nasıl tutmak, özür dilemek ya da takdir etmek ya da istediğini hissettirmek gibi neden söylenmesi gerekmiyor. Seni seven biri seni gerçekten seviyor, seni düzeltmek için elinden geleni yapıyorlar, ne yaparsan yap, elinden geleni yapabileceklerinden emin olman için elinden geleni yapıyorlar. Sana neye ihtiyaç duyduğunu özel olarak anlatmamalarını istiyorlar. Adım adım açıklamanı beklemeyecekler. Hayır, her zaman doğru yolu bulamıyor olabilirler, ancak

deneyebilirler

Devamını Oku »

Tesla Modeli X sahibi, falcon kanadından sonra 1 milyon dolar talep ediyor Arka kapılar çarpışmadan sonra yangın nedeniyle arabada yakalandı

     Paylaşın      Facebook          Tweet          Pinterest          E-posta     [19459011)        Tesla Model X'in tanımlayıcı özelliklerinden biri, ikinci koltuk sırasına erişmek için çarpıcı bir şekilde yükselip dışarıya çıkan falcon kanatlı arka kapılardır. Göz alıcı mı? Emin. Tamamen gerekli mi? Belki de değil – Elon Musk bile bazen zorlu kapıları ikinci kez tahmin ediyordu; bu da Tesla'nın Model S.'ye üst …

Devamını Oku »

İspanya'nın Kanarya Adaları feribotla geçtikten sonra kayganlaşıyor …

                                                                                                          Kanarya Adaları'ndaki Las Palmas limanındaki bir feribot kazası, üç kilometre uzunluğunda bir dizel kayganlık yarattı.      İspanya sahil güvenlik mürettebatı, yolcu vapurunun iskeleye çarptıktan sonra Gran Canaria'daki tatil adasındaki 3 km'lik (1.9 mil) uzun dizel kayganlığı temizlemek için Pazar günleri çalıştı.                                                                       140 yolcu taşıyan feribot, Cuma günü geç saatlerde, Afrika'nın kuzeybatısındaki İspanya'nın …

Devamını Oku »

Skandal Fotoğraftan Sonra Yeni Paylaşım

<! – düzenle 3: Bir sonraki reklam alanına yalnızca yazı içeriğinde sayfanın bir sonraki sayfaya gelinmesi. Bu alan şu bir reklamla boş bir alan gözükmeyecektir. Zaten reklam koymayacağım diyorsanız bir şey yaprağı yok. Eğer reklamın koyacağım derseniz ise alanın doğru olduğu ve önereceğiniz bilgiler. Açıklamaları okumaya devam ediniz: Eğer siz de bu konuda reklam yayınlamayı düşünürseniz Öncelikle 2 satır ve …

Devamını Oku »

İtalya emlakçıları araç sipariş ettikten sonra protesto gösterileri düzenlediler

Yavaş satan Tipo kompaktlar bayilik kitaplarına kaydı.       Luca Ciferri             Otomotiv Haberleri Avrupa 21 Nisan 2017 06:01 CET İtalya'daki TURIN – Fiat Chrysler Otomobil satıcıları, şirket sipariş etmedikleri 6.000 yeni araç için faturalandırdıktan sonra otomobil şirketine protesto gösterdi. Bayilikler, Şubat ayı sonlarında araçlarını bayi yönetim sisteminde keşfetti. Araçlar ağırlıklı olarak yavaş satan Tipo kompakt otomobiller …

Devamını Oku »

Elektrikli bisiklet 'ayağa kalkıp gitti, sonra stow'u bıraktı …

                                     Katlanabilir elektrikli nakliye benim için yeni bir kategori oldu ve bu yılın başlarında CES'de oynamak zorunda olduğum 30 kiloluk URB-E Sport GT motorlu bisikletten çok etkilendim.                                                                                 Tek şarjla yaklaşık 16 mil sağlayan 36V 30 hücreli lityum iyon pilin tek bir şarjıyla 14 MPH'ye kadar çıkarabilirsiniz. Katlandığında, 39.5 x 15.5 inç ölçülür. Genişletildi sadece 36 x 26.5 …

Devamını Oku »

Tata Motors, Mahkeme Yasağından Sonra Bazı Eski Teknoloji Kamyonlarını İhraç Etti

                         Tata Motors, Çarşamba günü yaptığı açıklamada, Hindistan'daki satışlarında beklenmedik bir yasaklamanın ardından satılmamış eski kamyon stoklarının bir kısmını ihraç etmeyi planladığını söyledi. Hindistan'ın üst mahkemesi, satılmamış envantere oturan büyük otomobil üreticilerinin paylarında keskin bir düşüşe neden olan 1 Nisan'dan itibaren eski Euro III yakıt teknolojisinde çalışan araçların satışını yasakladı. Ülkenin en büyük kamyon ve otobüs üreticisi Tata Motors, ticari …

Devamını Oku »

Katolik Okulları Suck Eden Neden 8 Nedenler Thought.is Nereden geldim, Katolik okullar pratikte norm. Bazı arkadaşlarım Katolik okulundaki mutlu yıllarından ötürü Katoliklikten ayrıldıklarını ifade ettiler. Hâlâ daha yüksek bir güç, belki de Tanrı'nın varlığına inanırken, anladım ve kızgınlıklarını paylaşıyorum. İster sevilsin ya da sevmeyin, bir Katolik okulunda eğitim görürken büyüdüyseniz, muhtemelen neden bahsettiğimi bileceksiniz. Ancak yine belki de deneyimleriniz farklıdır. Bana gelince, Filipin Katolik okullarının neden emildiği 8 nedeni var: 1. Doğal Hareket yerine Alışkanlık olarak Namaz. Her gün dersler başlamadan önce bayrak töreni sırasında 15 dakikalık bir dua toplantısı düzenledik ve bu da okul saat 6:30 gibi erken saatlerde olmamız gerektiğini gösteriyordu. Eğer namaz başlamış olsaydınız sonra geldiyseniz, üç kez geç kaldıysanız, bir günün yokluğuna tekabül edecek bir "gecikmeli kayma" alırsınız. Gün boyunca, her sınıftan önce ve sonra dua edelim, bu yüzden 6 sınıfa sahip olsaydık, bu otomatik olarak 12 ibadet eder. Ayrıca, öğle molasında ve öğle molasında yemek öncesi dua ettik. Öğle yemeğinden sonra The Angelus adlı özel bir duayla öğleden sonra The 3 O'Clock Namaz adlı başka bir özel dua vardı. Eğer Ekim (Raserse'nin ayı) ise, o zaman her gün tespih ederiz. Yalan söylemeyeceğim. Ben ve sınıf arkadaşlarımın birçoğu dua yığını anıla okudu ve gerçekten niyetle ya da kalpten dua etmedi. 2. Zorbalığa Rahat Tolerans. Anaokulundan üniversiteye kadar Katolik okuluna geldim. Filipin'deki en iyi okulların çoğunluğunun Katolik mülkiyetinde olması nedeniyle gerçekten seçeneğiniz yok. Toplamda, 4 farklı Katolik okuluna gittim. Hepsinin kabadayılıklarla uğraşmak için berbat yöntemleri vardı. Lise döneminde bir grup kız öğrenci birkaç öğrenciye zorbalık yapmaya devam ediyordu. Faktöre harekete geçmeden çok, gerçekten çok zaman aldı ve sadece bir okul arkadaşıyla neredeyse fiziksel olarak istismar edilen bir olay tırmandı. Zorbalığa birkaç gün askıya alındı ​​ve hiçbir şey daha proaktif olmadı. Okul, zorbalık hedefleri için asla danışmanlık hizmeti sunmadı. Üniversitede bunu kendim yaşadım. Bir sınıf arkadaşı (ve daha sonra bir arkadaşı) bana öğretmen ve diğer öğrencilerin önünde bağırarak zorbalık etti ve beceriksizce komik olduğunu düşündüğü için öğretmen hiçbir şey yapmadı ve daha sonra güldü. Bu olay diğer olaylara tırmandı. Yine, okul şikayetlerine rağmen hiçbir şey yapmadı ve yalnızca hukuki işlem başlatmak için tehdit edince onlara başvurdu. Öğrenci İşleri Şefi, "Hıristiyan yolu" olduğu için, kabadayı "affet" etmem için ve sorun yaratmamak için "yalvarırım" diye yalvardı. "Öğrencilerin okula devretmek istediğimden dolayı davamı düşürdüğümde (evet, O kötü), aynı zorbanın fiziksel olarak başka bir sınıf arkadaşına saldırdığını duydum. Hayır, kaydında bir erteleme ya da işaret almadı. Bana yaptığı ve diğer sınıf arkadaşı için yaptığı tek şey, değersiz, samimi olmayan bir özür dilemekti. 3. Okul İtibarıyla İlgili Endişeler Katolik okulları, Hıristiyan değerlerin geliştirilmesine yönelik bir tespite rağmen, gelirleri ve itibarları ile daha fazla ilgileniyor gibi görünüyor. Daha önce de belirttiğim gibi, eski okulum şarj cihazlarına basmamamı istedi ve belli bir şeyin medyaya veya halka sızmasına izin vermemek için elinden gelen her şeyi yaptım. Üniversite bölümünün gazetesinde yer aldım ve okulun ya da bedeninin eleştiren herhangi bir makalesi daima öfkelendi ya da gazeteden çıkarılmaya çalışıldı. Farklı bir Katolik Üniversitesi'ne geçtiğimde okul gazetesine de kaydolmuştum. Rahibeler ve rahipler gazeteciliğimizde bizi "şeffaf" olmaya teşvik etti ancak gazetemizin bir baş rahib tarafından kontrol edilmesini ve öğrencinin bedenine gönderilmeden önce onaylanmasını talep ediyordu. Yine, okulu olumsuz yönde etkileyen makaleler, öğrenci bütçesinde yansımayan bazı eksik öğrenci ücretleri üzerine soruşturma parçaları, dükkanlardaki veya kantindeki eşyaların neden aşırı fiyatlandırıldığını bulmak için malların arızalanması, mülakatlar Öğrencilerin yayınladığı şikayet vb. Burada bir desen görebilirsiniz. Son zamanlarda tanıdıklarımın Facebook postasında tökezledi. 14 yaşındaki kızkardeşinin bir öğretmen tarafından nasıl zorbalığa uğradığını açıkladı, ancak okul öğretmeni cezalandırmadı. Bu, Facebook olayını yazana kadar yayınlandı ve viral hale geldi.

Aynı şey, başka bir öğrenciye karşı cinsel taciz şikayetlerini göz ardı eden ve başka bir Katolik okulundaki başka bir öğrenciye oldu ve öğrencinin kardeşinin Facebook yazığı zaman dinlendi (yarım asmış olsa da) Viral gitti. 4. Elbise Kodlarını Kontrol Etme. Kostüm kodlarının veya üniformaların kadın düşmanı ve klasist olduğuna nasıl inanıyorum. Bu, bütünüyle başka bir tartışmaya ihtiyaç duyuyor. Katolik okullarının takıntılı …

Devamını Oku »

Bu genç, Kylie Jenner'i aldıktan sonra Prom'e sordu …

Snapchat / kylizzlemynizzl ve Twitter / @ethandang_ Her zaman kolay değildir Reddetmek hafifçe, çünkü, eee, bu ego bir tür vurmak, değil mi? Ancak, bu gençin tercih ettiği tarih onunla birlikte baloya gitmeyeceğini söylediğinde, bir yükseltme yapmaya karar vermeye karar verdi – daha özel olarak, Kylie Jenner'dan dansa kendisine sordu. biraz garip, değil mi? Ünlülerin baloya gelmesi için birçok çağrı yapıldı …

Devamını Oku »

Akıllı telefon uygulaması güvenlik tehdidi bulunduktan sonra Bosch'tan çıkacak

Argus Cyber ​​Security araştırmacılarının araç iletişimlerini kontrol etmesine izin verecek bir güvenlik açığı keşfettikten sonra Robert Bosch, satış sonrası bağlantı donanımı ve akıllı telefon uygulaması için bir düzeltme paketi yayınlayacak. İsrail merkezli bir siber güvenlik şirketi olan Argus, sürücülerin araç teşhislerini kontrol etmesine ve yakıt tüketimini izlemesine olanak tanıyan Bosch'un Drivelog Konnektörü dongle'sı arasındaki kimlik doğrulama sürecinde güvenlik açığını ortaya …

Devamını Oku »

ABD, ustalığı suçladıktan sonra spam şemasını durdurmaya çalışıyor …

                                     Adalet Bakanlığı, her yıl yüz milyonlarca spam e-postayla gönderilen küresel bir bilgisayar ağını sökmeye çalıştığını açıkladı.                                                                       Pazartesi günü yapılan açıklamada, sözde Kelihos botnet planının başında olduğu iddia edilen Rus bir adamın, ABD makamlarının talebi üzerine İspanya'da gözaltına alınmasından sonra geldiği bildirildi. Pyotr Levashov a karşı açılan bir ceza davası muhafaza edilmiş durumda. ABD mahkemesinde açılan bir sivil …

Devamını Oku »

NFL, Twitter'dan sonra Amazon'a akışını gerçekleştiriyor

                                                                                                          Amazon, Perşembe gecesi NFL oyunları için akış haklarını kazandı. Bu 2016 resmi, Chicago Bears'ın Deiondre Salonu'nu gösterir.      Amazon Çarşamba günü Prime abonelik video servisine profesyonel futbol oyunları eklemek için anlaşma yaparak canlı spor akışını gerçekleştirmek için bir adım attığını açıkladı.                                                                                 2017 sezonunda Ulusal Futbol Ligi'nin 19 perşembe akşamı maçlarına katılma …

Devamını Oku »

Bakanlar, iş güvenliği sağlandıktan sonra PSA-Opel ortaklığını destekleyeceklerini söyledi

Madeline Odaları Reuters 5 Nisan 2017 15:02 CET Almanya ekonomi bakanı Brigitte Zypries, PSA Group CEO'su Carlos Tavares ile Fransız otomobil üreticisinin General Motors'tan Opel almayı planladığı konusunda yapıcı görüşmeler yaptıklarını söyledi ve mevcut işçilik anlaşmalarının Kal Çarşamba günü yapılan görüşmeler sonrasında Zypries, "Bay Tavares'in tüm toplu sözleşmelere saygı gösterilmesi ve devam ettirilmesi taahhüdünü özellikle memnuniyetle karşılıyoruz" dedi. "Federal hükümet …

Devamını Oku »

Uydu başlattıktan sonra roketi tekrar limanda kullandı …

                                                                                                          SpaceX Falcon 9 roketinin ilk etabı, 4 Nisan 2017 Salı günü Port Canaveral, Fla'da şafaktan önce, "Tabii ki Seni Seviyorum" isimli bir deniz gemisi gemisindeki Liman Kanaveralesi'ne çekildi. Şoför 9'da Falcon 9'un fırlatılmasıyla iki kez rampa yapıldı. . (Malcolm Denemark / Florida Today, bugün AP üzerinden)      Kaynak

Devamını Oku »

“Önce Kitap Okuyalım Sonra Çık disariya Oynayalım”

Çankırı Belediyesi, Uçak Kütüphane alanını Geleneksel çocuk oyunları ile Donatti. Belediye, okul Kütüphanelerin bulundugu Alanları, Çocukların oyun Alanları Haline çeviriyor. Çankırı Belediyesi Çocuk Meclisi aktivite de Sonra ettik gerçekleştirilebilecekleri Fiziksel Temalı şimdi bahçelerinden Eğitim Projeleri Birimi, geleneksel ve yerel oyunlar okul bahçelerinin sonrasında uçak kütüphane alanına taşıdı. Uçak Kütüphane'ye giden pistte mektup, yağ satarım bal satarım, kaleli yakar top, tombik, …

Devamını Oku »

Tarihte bugün: Sultan Abdülaziz, 346 yıl sonra Mısır'a giden ilk padişah oldu | Tarihte bugün

Tarihte bugün: Sultan Abdülaziz, 346 yıl sonra Mısır'a giden ilk padişah oldu      Tarih Dosyası / Dünya Bülteni GÜNÜN OLAYI Sultan Abdülaziz Mısır Gezisine Çıktı (1863) Osmanlı hükümdarlarından Sultan Abdülaziz Mısır'a 3 Nisan 1863'te Fenerbahçe'de vapuru ile Mısır'a gitti. Fevz-i Cihat ile Mısır Seyahatine çıktı. Yanında yeğenleri başkanı Şehzade Abdülhamit'in de Şehzade Murat'ı ve Şehzade Mehmed Reşad'ı da dahildoğdu. Sultan …

Devamını Oku »

Yeni çıkan bir ankete göre, emisyonlardan sonra dizel şüphe uyandıran otomobil alıcıları

Motorists, yeni yayınlanan bir ankete göre, emisyonlarının olumsuz etkileri konusundaki son raporlar üzerine dizel modellerden kaçıyor. Carbuyer.co.uk tarafından yapılan bir ankette, sürücülerin yüzde 61'inin bir sonraki model olarak bir dizel seçilmesi öne sürülürken, Google arama trendlerinin analizi 2017 yılının ilk çeyreğinde hibrid otomobil arayan alıcıları ortaya çıkardı. Bulgular, Şubat 2017'de mazot satışlarının şubat 2016'ya göre yüzde 9,2 oranında azaldığını gösteren …

Devamını Oku »

Feds, potansiyel verilerden sonra finansal yardım aracını çekiyor …

                                     Federal bir öğrenci yardımına başvuran aileler, federal yetkilileri süreci yumuşatan bir çevrimiçi aracı kaldırma olasılığı bulunan bir veri ihlalinden sonra bu yıl ekstra zorluklarla karşı karşıya.                                                                                 Eğitim Bölümü ve İç Gelirler Servisi Perşembe günü, Veri Erişim Aracı olarak bilinen çevrimiçi bir hizmetin bu uygulama sezonunun geri kalanında çevrimdışı kalacağını söyledi. Geçmişte aileler, federal yardımı almak için …

Devamını Oku »

'Sualtı Çorapları' siklon hitlerinden sonra endişe ediyor …

                                                                                                          Great Barrier Reef, Avustralya'nın Queensland eyalet kıyısından 2,300 kilometre uzanan dünya miras listesinde yer alan deniz ekosistemidir      Kuzeydoğu Avustralya'ya çarpar güçlü bir siklon, düşük basınç altında olan Great Barrier Reef'i daha da hasara uğratabilir ve parçaları "sualtı çoraklığı" haline dönüştürebilir, Perşembe günü uyarıldı.                                                                                 Dünya Mirası listesinde yer alan deniz ekosisteminin …

Devamını Oku »

Hayranı, Beyonce'yle konuştuktan sonra hayatını ka …

                     2017-03-28 17:12:00                                           Beyonce'nin kanser hastası olduğu lise öğrencisi hayranı, ünlü şarkıcıyla tanıştıktan sonra bir süre sonra yaşama veda etti. Ünlü şarkıcı, hayranının son isteğini yerine getirmiş oldu. Ebony Banks, ünlü şarkıcıyla yüzyüze görüştükten sonra hayatını kaybetti. Kanser hastası ve uzun yıllar MD Anderson Kanser Merkezi'nde tedavi gören Bankalar için sosyal medyada Beyonce ile tanışmasını destekleyen bir kampanya …

Devamını Oku »

Uber kısa sürdükten sonra kendi kendine çalışan otomobil programını sürdürüyor …

                                                                                                          Bu pazartesi, 12 Eylül 2016, fotoğraf, bir grup kendi kendine sürüş Uber aracı, Pittsburgh'daki Uber'in Gelişmiş Teknolojiler Merkezi'ndeki bir medya önizlemesi sırasında gazetecileri sürmek için kendilerini konumlandırıyor. 27 Mart 2017 Pazartesi günü Uber, hafta sonlarında meydana gelen bir kaza sonrasında askıya alınmasının ardından Arizona ve Pittsburgh'daki kendi kendine sürüş otomobil programını yeniden başlatacağını açıkladı. …

Devamını Oku »

Knorr-Bremse, Haldex'ten sonra daha fazla satın alabilir

Irene Preisinger Otomotiv Haberleri Avrupa 27 Mart 2017 12:00 CET Grup CEO'su Klaus Deller Reuters'e verdiği demeçte, İsveçli Haldex için bir teklifte bulunulduktan sonra, MUHASEB – Alman tedarikçisi Knorr-Bremse'nin her biri 500 milyon avro (543 milyon ABD doları) değerinde yeni satın almalar yapabildiğini söyledi. Deller, Pazartesi günü verilecek röportajda olası hedeflerle ilgili ayrıntılar sunmaksızın "Şirketin genişlemesi ve yenilenmesi ile henüz …

Devamını Oku »

Uber, kazadan sonra San Francisco'da kendi kendine sürüş otomobil programını sürdürüyor

Fresco News tarafından dağıtılan bir videodan elde edilen görüntü, Arizona'daki Tempe'deki diğer iki aracın bulunduğu belirgin bir çarpışmadan sonra bir Volvo'nun yanına döndü. SAN FRANCISCO – Uber Technologies Inc. tarafından işletilen şoförsüz araçlar, kendiliğinden çalışan otomobillerinden biri Arizona'da düştükten sonra Pazartesi günü San Francisco'da yola çıktı ve binicilik şirketi "19459007] Arizona'daki Pittsburgh ve Pennsylvania'daki Pittsburgh'daki özerk araçlar, tespit edilmeyi reddeden …

Devamını Oku »

Uber Arizona kazasından sonra özerk otomobil testlerini durdurdu

Uber, geçen yıl özerk otomobil yol denemelerine başladığında manşetlere çarptı, ancak şimdi Arizona'daki bir kazadan sonra program sürücüsüz bir test arabasından ayrıldıktan sonra durduruldu. Taraf. Kendinden tahrikli bir donanıma sahip bir Volvo XC90'un bulunduğu kaza, başka bir otomobille çarpıştıktan sonra SUV'ın yana döndüğünü gördü. Raporlar, tekerleğin kontrolünü ele geçirmeye hazır iki güvenlik mühendisi olduğunu gösterse de kaza meydana geldi. Kazanın …

Devamını Oku »

Uber Arizona çöküşünden sonra kendiliğinden çalışan otomobil programını askıya alıyor

Fresco News tarafından dağıtılan bir videodan alınan bir resimde, Arizona'daki Tempe'deki diğer iki aracın bulunduğu belirgin bir çarpışmadan sonra bir Volvo'nun yan yana döndüğü görülüyor.        Uber Technologies, doğmakta olan teknoloji ile donatılmış bir araç Arizona yolunda çöktüğü için özerk araçlar için pilot programını askıya almıştı, binicilik şirketi ve yerel polis. Kaza, en son özerk araçlarla deneme yapan birçok şirketten …

Devamını Oku »

İngiltere, Londra saldırısından sonra WhatsApp şifrelemesini hedefliyor

                                                                                                          WhatsApp mobil mesajlaşma servisidir      İngiliz hükümeti Pazar günkü açıklamasında, güvenlik servislerinin WhatsApp gibi şifreli mesajlaşma uygulamalarına erişebilmesi gerektiğini ve bunun parlamento saldırısının ardındaki katil tarafından kullanıldığını gösterdiğini söyledi.                                                                                 Bildirildiğine göre, Çarşamba günü Westminster'de meydana gelen bir fırtınada ölenler olmak üzere dört kişiyi öldüren 52 yaşındaki Britanyalı Halid Masood saldırıdan önce …

Devamını Oku »

NASA astronotları sakatların Öldürmesini emrediyor – sonra da köknar …

                                  SpaceX'in Dragon kapsülü, Uluslararası Uzay İstasyonuna yaklaşık bir ay geçtikten sonra, Dünya'ya başarılı bir şekilde döndü. 40 farenin cesetlerini de içeren bilim deneyleriyle dolu podül şimdi gemiyle NASA'ya gidiyor.                  23 Şubat tarihinde ISS ile bir gecikme hattı yapan bir kapsül, bir bilgisayar hatası nedeniyle ISS'de, istasyonun robotik kolunu kullanarak Avrupa Uzay Ajansı astronotu Thomas Pesquet tarafından Pazar …

Devamını Oku »

Karışıklığın ortasında 6 ay sonra Uber cumhurbaşkanı istifa etti

Uber Cumhurbaşkanı Jeff Jones Uber'e bir sene öncesinden Hedef geldi. Fotoğraf kredisi: Hedef Corp. SAN FRANCISCO – Uber Technologies Inc. Başkan Jeff Jones, binicilik şirketini saran çok sayıda tartışmadan dolayı bir yıldan kısa bir süre içinde ayrılıyor. Skandallar, cinsel taciz iddialarından ve zehirli bir çalışma kültürüne, CEO'su Travis Kalanick'in mücadele davranışına kadar uzanıyor. Bloomberg 28 Şubat'ta Kalanick'in bir uber şöförünü …

Devamını Oku »

Nicole Mason Gerçek: Vücudumdaki her organ başarısız oluyordu ve kilomuz 56 kiloya düştüğünde anoreksiya nihayetinde kazanmış gibi göründüğünden ailemden cenaze törenimi planlaması söylendi. Ben: Ben iyiyim! Şişmanım! Kendimden nefret ediyorum! Ben değersiz biriyim. Yardıma ya da mutlu olmaya layık değilim. Bu benim hatam. Gerçek: Sadece 1 ½ yıl sonra, 221 pound'luk bir şiddetle çarpan bir ölçeğe baktım. Her gün boş yiyecek sarmalayıcılar şirketinde uyuşukluk yaşlı yemek yeme bozukluğu yerini anoreksi yerini aldı. Ben: Kendimden nefret ediyorum! Umutsuzum! Artık kendimi tanımıyorum bile. Yardıma ya da mutlu olmaya layık değilim. Bu benim hatam. Bulimia, umutsuzca kilo vermeye çalışırken yavaş yavaş hayatıma girdi. Aşırı müshil ile yakalanan – kısıtlama döngüsü; Bir defada 100 müshil ürünü yuttuğumda kaya tabanına düştüm. Ben: Ben iyiyim! Bu yemin ederim son olacak! Kendimden nefret ediyorum! Yardıma ya da mutlu olmaya layık değilim. Bu benim hatam. Başlangıç ​​ İsmim Brittany Burgunder'dır, ancak hayatımın çoğunu kendim koşturarak geçirdim. On yıldan fazla bir süredir, dünyadaki en yüksek ölüm oranına sahip zihinsel hastalık olan bir yeme bozukluğu ile savaştım. Sevgi dolu ebeveynlerle büyüdüm, ulusal derecede tenis sporcusuyum, düz 'A' öğrencisi ve yetenekli bir at binicisiyim. Mükemmel bir gülümseme üzerine – parlak bir geleceği olan normal bir hayatını tasvir eden bir gülümseme, ancak altında yatan sıkıntılı ruhu kamufle eden bir gülümseme üzerine boyadım. Gerçeğim, acı çekingen, sürekli alay ve reddettiğim akranlarımın korkunç kaygı, depresyon ve OKB'ye yol açmasıydı. Neden herkes gibi uymadığımın ve hayatın neden bu kadar zor olduğunu anlamadım. Bildiğim şey, ben ile ilgili bir sorun olması ve yeterince iyi olmaması gerektiğiydi. Anoreksiya Anoreksi, 13 yaşındayken hayatıma girdi. Yeme bozukluğunun ne olduğunu, sadece yiyecek konusunda tuhaflaştığım ve kalori, bedenim ve egzersizle ilgili garip yeni ritüeller geliştirdiğim hakkında hiçbir fikrim yoktu. Hastalığım beni yaşamak istemediğim bir yaşama yönlendirmede yeni bir yol bulduğum için endişelerim yatıştı. Ailem hızla müdahale etti ve eve tedavi edeceğim düşüncesiyle beni ilk tedavi merkezime yolladı. Meydan okurcasına, bir sorunum olduğu gerçeğinden habersiz davrandım. Benim gibi diğer insanlar olduğuna şaşkına döndüm ve bir sefer yalnız hissetmedim ve arkadaş oldum. İyi fiziksel sağlıkta eve döndüğüm halde aklım kesinlikle düzelmedi ve bir dizi yeni hileyle silahlı olarak döndüm. Egzersiz bağımlısı oldum. Üç farklı spor müsabakası üyeliğime sahibim, bu nedenle aynı kişiler aşırı davranışsal davranışı gözlemlemiyorlardı. Çoğu yaş grubum baloya giderken, 20'li yıllarda kalp atış hızı ile hastanede yatıyordum. Bir zamanlar Division 1 üniversite tenisi oynamak için bir potansiyel buldum, ama şimdi eğlenmek için babamla bile uğraşamayacak kadar zayıftı. Bir zamanlar en büyük sevincim olan atım satıldı, çünkü ben daha derin ve daha derin bir yanılsama dünyasına girdim. Gerçeklerime olan tek tanık – gerçek düşüncelerim ve gerçek çatışma – bir günlük ve kalemdi. Her gün yoğun bir şekilde yazmıştım. Yeme bozukluğumun yanı sıra, sahip olduğum diğer tek şirket buydu. Günlüklerimde yazarken başımdaki karışıklığın bir kısmını boşaltmaya yardımcı oldular, ancak sırlarımı korumak için dergilerimi gizli tutmayı emrediyorum. Davis Kaliforniya Üniversitesi'ne kabul edildi. Ailem, ihtiyacım olan yeni başlangıç ​​olabileceğini düşünerek gitmeme kararı verdi, ancak yanılıyorlardı. Sınıf arkadaşlarımla sosyalleşmeye çalıştım, ama açıkçası onlar gibi değildi ve dışarı çıkmak için yapılan her davetiyeyi geri çevirmek için bir bahanem vardı: Eğer yiyecek veya alkol olsaydı ne olurdu? Egzersiz programıma müdahale etseydi ne olurdu?

ise Yeme bozukluğumla hayatım çabucak bana oldu. Profesörleri sevdiğim kadarıyla UC Davis'teki vaktim kısa sürede korkunç bir varlığa dönüştü. Özel bir yeme bozukluğu istikrar programına kabul edilmeden çok önce değildi. Tüm dolaşımı kaybettim, saçlarım düştü ve karaciğer yetmezliğiyle yüzleştim. Kilom çok düşük bir kilo aldı ve ailemden cenaze düzenlemeleri yapılması söylendi. Ancak bu bana gerçek dışı geldi. Ben şişmanım. İyiydim. …

Devamını Oku »

Metanobaktiğin ve Bakır ile Bactanın Bağlantısı … Özet Methanobactins (mbs), düşük molekül ağırlıklı (<1,200 Da) bakır- Birçok metan oksitleyici bakteri (metanotrof) tarafından üretilen bağlayıcı peptidler veya chalkophores. Bu moleküller belirli demir bağlama sideroforlarına benzerlikler gösterir, ancak bakır sınırlamasına yanıt olarak eksprese edilir ve salgılanır. Yapısal olarak, mbs, bakır koordinasyon bölgesini oluşturan ilişkili tiyoamit gruplarına sahip bir çift heterosiklik halkayla karakterize edilir. Halkalardan biri her zaman bir oksazolondur ve ikinci halka bir oksazolon, bir imidazolon veya bir pirazindion parçasıdır. Mb molekülü, (i) halka oluşumu, (ii) bir lider peptid dizisinin bölünmesi ve (iii) bazı durumlarda bir sülfat grubunun eklenmesi de dahil olmak üzere bir dizi posttranslasyonel modifikasyona uğramış bir peptid öncüsünden kaynaklanmaktadır. İşlevsel olarak, mbs bakır alım sisteminin hücre dışı bileşenini temsil eder. Bakır alımındaki bu rolü ile tutarlı olarak, mbs bakır iyonları için yüksek afiniteye sahiptir. Bağlandıktan sonra, mbs hızla Cu 2+ 'i Cu 1+ e indirir. Bağlayıcı bağlamaya ek olarak, mbs çoğu geçiş metalini ve geçiş metaline yakın bağlar ve ana metanotrof yanı sıra diğer bakterileri toksik metallerden korur. Mbslere, başta redoks ve metal bağlayıcı özelliklerine dayanan diğer birçok fizyolojik fonksiyonlar atanmıştır. Bu derlemede, bu yeni metal bağlayıcı peptit tipinin mevcut durumunu inceliyoruz. Potansiyel uygulamalarını, mbslerin çoklu metallerin biyoyararlanımını nasıl değiştirebildiğini ve mbs'lerin metanotrofların fizyolojisinde nasıl oynayabileceğini de keşfediyoruz. GİRİŞ Methanobactins (mbs) ilk önce aerobik metan oksitleyici bakterilerde (metanotroflar) tanımlandı. Bu göze çarpan bakteri grubu, karbon ve enerjinin tek kaynağı olarak metan kullanarak büyüyebilir. Oksijen ve metanın bulunduğu ortamlarda bulunurlar ve biyosferde üretilen metanların çoğunun tüketilmesinde önemli bir rol oynarlar ve böylece küresel ısınmaya olan etkilerini azaltıyorlar (1, -4). Metanogenezis (5) yoluyla üretilen, ucuz, kolay bulunabilen ve yenilenebilir karbon kaynağı ile üretildikleri takdirde, metanotrofların toplu ve ince kimyasalların üretimi için ve çevre kirleticilerin biyolojik olarak temizlenmesinde önemli bir potansiyeli vardır (2, 6 , -8). Metan üzerinde yetişen bir bakterinin ilk raporu, 1906'da Hollanda'da Delft'te bulunan Beijerinck'in laboratuvarında çalışan Söhngen tarafından yapıldı; bu gaz, 1906'da Bacillus metanicus'un izolasyonunu Su bitkileri ve gölet suyu (9). 50 yıl sonra bu mikropun yeniden izole edildiği ve adı değiştirildi Pseudomonas metanica (10, 11). İkinci metanotrof, Metilokokus kapsülatus (Texas türü), 1966'da izole edildi (12). Methanotrof biyolojisindeki bir dönüm noktası, Whittenbury ve meslektaşları tarafından çeşitli karasal ve tatlı su ortamlarından izole edildiğinde ve metan üzerinde büyüyen 100 yeni aerobik metanotrofu anlatan 1970'de geldi (13). Daha sonra bu metanotrofların metan üzerinde yetişebilme yeteneği, karbon asimilasyonunun yolakları, istirahat evreleri (kistler ve sporlar) oluşumu, morfoloji, kompleks intrasitoplazmik zarın bulunduğuna dayanarak tip II'ye karşı tip II sınıflandırması geliştirdiler. Düzenlemeler ve DNA'ların mol yüzdeleri G + C içeriği. Daha sonra, Bowman ve meslektaşları çeşitli ortamlardan benzer sayıda metanotrof izole etti ve bunları Whittenbury ve meslektaşlarının programına ve 16S rRNA filogenezine (14, 15) göre sınıflandırdılar. O sırada hiçbir DNA sıralamasının yapılmamış olmasına rağmen, Whittenbury ve arkadaşlarının genel sınıflandırma şeması bugün metanotrofların gruplandırılmasında sağlam ve kullanışlı bir yöntem olmaya devam etmektedir. Buna göre şu anda 15 jenerat metanotrof bulunmaktadır Gammaproteobakteri sınıfının Methylococcaceae ve 3'ünde Methylothermaceae ailesi bulunmaktadır. Metilobakter Metilokaldum Metilokokus Metilogea Metiloglobulus Metilomagnum ] Metilomarinat Metilpomfurus Metilfosfamid Metilfosfat, Metilpomkarboksilik Asit Metanol, Metilokarboksilik Asit Metilpomkarboksilik Asit Metilpomkarboksilik Asit Metanol (19459016, Metilosarkin (19459016) ve Metilovüum ailesi metanotroflarıdır ve Metilohalobius Metilomarinovum , Ve Metiltermermus Metiltothermaceae familyasındaki metanotroflardır (16, -21, 227). Methylocystaceae familyasında ve Metilocella familyasında Alphaproteobacteria cins Methylosinus ve Methylocystis , Metiloferula ve Metilokapsa 'nın ailesi Beijerinkiaceae'de . Son 15 yılda, çoğul bileşiklerini büyüme için kullanabilen Metilokolella Metilokapsa ve Metilokistis cinslerinde fakültatif metanotroflara ilişkin raporlar artmaktadır Metan (22, -26). Günümüzde ayrıca, Crenothrix ve Clonothrix gibi diğer cinslerden filamentli metanotroflar ve yüksek sıcaklıklarda büyüyen ve düşük sıcaklıklarda yetişen cins Methylacidiphilum'un nonproteobakteriyel (verrucomicrobial) metanotrofları PH da yakınlarda keşfedilmiştir (27). Son olarak NC10 filumunun bir üyesi olan "Candidatus Metilomirabilis oksifizasyonu" zorunlu anaerob olmasına rağmen metan oksidasyonu için dioksijen ürettiğini gösterdi (28,29). Birlikte ele alındığında, bu veriler gezegenimizin birçok ekosisteminde metanotrofik bakterilerin yaygın doğasını açık bir şekilde göstermektedir. Metanotrofların fizyolojisi ve biyokimyası Metanotroflar metan'ı bir enerji kaynağı olarak kullanabilir ve ayrıca (6, 30, 31) için karbon sağlamaktır. Metanın metanole ilk oksidasyonu metan monooksigenaz enzim (MMO) tarafından katalize edilir. Aynı moleküler metan oksidasyon problemine (32, -37) evrimsel olarak bağımsız çözümler üreten MMO, membrana bağlı veya partikülat MMO (pMMO) ve sitoplazmik veya çözünür MMO (sMMO) olmak üzere iki yapısal ve biyokimyasal açıdan farklı formlar vardır . SMMO, aynı zamanda sınıf I ribonükleotid R2 alt-birimi için homolog olan çözünebilir di-demir monooksigenazlar (SDIMOs) (38) olarak bilinen geniş bir bakteri hidrokarbon oksijenaz grubuna ait olan üç komponentli bir bin nuclear demir aktif merkez monooksigenazdır Redüktaz. Methylococcus capsulatus (Bath) (39, -43) ve Methylosinus trichosporium OB3b (44, -47) 'den elde edilen iki çok benzer sMMO sistemi ayrıntılı olarak incelenmiştir. SMMO altı genli bir operon, mmoXYBZDC tarafından kodlanır ve üç bileşene sahiptir: (i) bir α-hidroksilazokinaz ile bir 250-kDa hidroksilaz (19459022) α alt birimlerinin (MmoX) substrat oksijenasyonunun meydana geldiği yerde çift çekirdekli demir aktif merkezini içerdiği yapı, (ii) flavin adenin dinükleotidli 39-kDa NAD (P) H bağımlı redüktaz (MmoC) FAD) ve Fe (19459022) 2 2 protez grupları ve (iii) protein B olarak bilinen bir 16-kDa bileşenini (MmoB) veya protez grupları içermeyen kuplaj / geçitlendirme proteini veya Metal iyonları (39, 48). Protein B için (39, 53, 54) hidroksilaz bileşeni (49, -52), nükleer manyetik rezonans (NMR) -tabutulan yapılar için X-ışını kristal yapıları vardır ve bu bileşiğin flavin alanı için bir NMR türetilmiş yapı vardır Redüktaz (55). Üç bileşen tarafından oluşturulan kompleks, küçük açı X-ışını saçılım analizi ve biyofiziksel olarak elektron paramanyetik rezonans spektroskopi, ultra-santrifüjleme ve kalorimetrik analiz ile yapısal olarak incelenmiştir (56, 57). SMMO'nun katalitik döngüsü kapsamlı bir şekilde incelenmiş ve çift-çekirdekli demir merkezindeki oksijen ve hidrokarbon aktivasyon mekanizmasının anlaşılmasına yönelik mükemmel ilerlemeler yapılmıştır (45) (45, 58, -62). Bununla birlikte, pMMO, bakır ve muhtemelen demir içeren membrana bağlı enzimdir (6, 37, 47, 63, 64). Tip I metanotroflardaki veziküler disklerin şeklini alan sıradışı intrasitoplazmik membranlar ve tip II organizmalarda eşleştirilmiş periferik tabakalar ile ilişkilidir (65, -75). İntrasitoplazmik membranlar pMMO'da zenginleştirilir ve sukroz yoğunluk gradyanlarında sedimantasyon hızı temelinde sitoplazmik membrandan fiziksel olarak ayrılabilir (76). PMMO'nun yapısı ve mekanizması hakkında bir anlayış, enzim çözünürken aktivite kaybından dolayı sMMO için olana göre daha yavaş ortaya çıkmıştır. PMMO, genler pmoCAB tarafından kodlanan yaklaşık 49, 27 ve 22 kDa'lık üç polipeptitten oluşur (77). Metanotroflarda genellikle bu pmo genlerinin birden fazla kopyası vardır (78, 79). Son yıllardaki araştırmalar, doğal pMMO'nun, hidroksilamin oksidoredüktaz ve amonyak monooksigenaz redoks çiftleri (82, -85) için bulunana benzer şekilde, pMMO'ya elektronlar (80, 81) sağlayabilecek metanol dehidrojenazı (MeDH) ile kompleks oluşturduğunu göstermiştir ). Bazı metanotroflar, mesela M. Kapsülatus (Banyo) ve M. Trichosporium OB3b, her iki MMO formunu üretebilir. En bilinen metanotroflar yalnızca pMMO'ya sahiptir, örneğin Metilomonas metanika Metilomikrobiyum album BG8, Metilokistis parvus OBBP ve verrukomikrobik ve NC10 metanotroflar. Beijerinckiaceae ailesindeki, örneğin Metilasella silvestris ve Metiloferula stellata içindeki sadece birkaç metanotrofun sMMO'ya sahip olduğu, ancak pMMO'ya sahip olmadığı (21, 86) MMO tarafından üretilen metanol, bir kalsiyum veya nadir toprak bağımlı pirroloquinoline quinone (PQQ) içeren MeDH (87, -91) ile formaldehite oksitlenir. Formaldehit, metanotrofik metabolizmanın metabolizmasının önemli bir koludur ve bir karbon (C 1 ara ürününün enerji elde etmek için CO 2'ye oksitlenebildiği veya asimile edildiği noktayı temsil eder Biyokütleye dönüştürdü. Formaldehid toksik olduğundan, metanotroflar bu metabolik ara maddenin birikimine karşı kendilerini korumalıdırlar. Formaldehit metabolizması için çoklu yollar metanotroflarda bulunur (2, 26, 92, -96). Örneğin, formaldehitin oksidatif dissimilasyonu, boya bağlı membrana bağlı (93) yoluyla ya da NAD + yoluyla tetrahidrometanopterine (H 4) [97,98] konjügasyonuyla ortaya çıkabilir ] Bağımlı (95, 96, 99) formaldehit dehidrogenazlar. Formül, formaldehidin formaldehit dehidrogenazlar tarafından oksidasyonundan kaynaklanır ve daha sonra metan, biyosentetik reaksiyonlar ve enerjinin oksidasyonu için NADH üreten bir NAD + [bağımlıformatdihidrojenazilekarbondioksit'eoksitlenirHücreiçinesil(100-102)Metanotroflaraynızamandaalfaproteobakteriyelvegammaproteobakteriyelmetanotroflardaaktifolanformaldehitinbiyokütleyeserinveribulozmonofosfat(RuMP)döngülerinefiksasyonuiçinikiyolasahiptirMetanotroflardakikarbonfiksasyonyolaklarıkapsamlıolarakgözdengeçirildi(bkzÖrneğinreferans6) Metanotroflardaki "Bakır Anahtar" Metan karakterizasyonu için erken teşebbüsler MMO'nun hücresel konumu hakkında farklı raporlar vasıtasıyla oksidasyon karmaşıktı. MMO'lar, suşuna ve bazı suşlar için raporlama laboratuvarına bağlı olarak çözünebilir veya membran ile ilişkili olarak tanımlanmıştır. Çeşitli gruplar başlangıçta partikül veya zar fraksiyonunda aktivite bildirdiler (103, 104), buna karşılık diğer gruplar çözünür fraksiyonda aktivite saptamıştı (105, 106). Sonraki çalışmalar hücresel konumun ekim koşullarına göre değiştiğini gösterdi. Oksijen kısıtlamasının çözünür fraksiyonda metan oksidasyonunu indüklediği bildirildi M. Trikosporium OB3b (36, 107). Bununla birlikte, oksijenin düzenleyici faktör olmadığı ve membrana bağlı ve çözünen aktiviteler arasındaki geçişin biyokütle konsantrasyonuyla ilişkili olduğu gösterildi (108). Bu "geçiş" in keşfedilmesinde tanımlayıcı an, Dalton ve meslektaşlarının M büyümeye çalıştıkları zamandı. Parvus OBBP, kemostat kültüründe yüksek hücre yoğunluklarına. M. Parvus OBBP, nispeten düşük hücre yoğunluklarında metan, hava ve nitrat mineral tuzları (NMS) çözeltisiyle birlikte verildiğinde büyümeyi durdurdu. Bununla birlikte, ek eser element çözümü eklendiğinde, kültürler derhal büyümeye başladı. İz element solüsyonundaki "gizli içerik", bakır iyonlarına indirgenmiştir (108). Daha sonra, M. Parvus OBBP, yalnızca bakır iyonlarına yüksek gereksinim getiren pMMO içeriyordu ve M ile o sırada gözlenen aynı yüksek hücre yoğunluklarına ulaşmasına izin verecek bir sMMO içermiyordu. Kapsülatus Banyo ve M. Trichosporium OB3b, bakır sınırlaması altında. Aynı suşlarla karşı karşıya kalındığında, suşlar sMMO'nun ifadesine geçti ve büyümeyi sürdürdü (35, 109). İlginç bir şekilde, bakırın daha önce sMMO içermeyen metanotrof olan Methanomonas margaritae 'nın büyümesini arttırdığı gösterildi, ancak bu orijinal gözlemler hiçbir zaman daha fazla araştırılmadı (110) Dalton ve arkadaşları Gözlemlerini detaylı bir şekilde incelediler ve bu "bakır geçiş" in varlığını kurdular, yani, iki farklı MMO formunun, hem sMMO hem de sMMO'ya sahip olan metanotrof kültürlerinin bakır-to-biyokütle oranına yanıt olarak metanotroflardaki ifadesinin düzenlenmesi PMMO. Metanotrofların metal bağımlı büyümesi üzerine daha önceki gözlemlerin birçoğunu açıklamalarını sağladı. Örneğin, M. Kapsülatus Banyo, sMMO'nun ekspresyonu yalnızca ortamdaki bakır iyonları tükendiğinde yüksek hücre yoğunluklarında gözlemlenirken, fazla bakır iyonlarının ilavesi bu metanotrofun aktif pMMO'yu ifade etmesine izin vermiştir. Daha sonra, Murrell ve meslektaşları moleküler seviyede, düşük konsantrasyonlarda bakır iyonlarıyla büyümenin altında sMMO ifadesi, sMMO gen kümesinin yukarı akışında σ 54 promotöründe başlatıldığını gösterdi ( mmoXYBZDC ). Tersine, yüksek bakır büyüme koşulları altında, sMMO ekspresyonu bastırılmış ve pMMO kodlayan genlerin yüksek seviyelerde ekspresyonu ( pmoCAB ) her ikisine de izin vermiştir. Trichosporium OB3b ve M. Kapsülatus Banyo, pMMO (34, 111, -113) kullanılarak büyüyecektir. Daha ileri araştırmalar bakırın metanotrofik fizyolojiyi ve gen ifadesini daha geniş ölçüde etkilediğini ortaya koymuştur. Örneğin, metanotroflardaki intrasitoplazmik zar içeriğinin büyüme ortamında bakır arttıkça arttığı bulundu (66, 109, 114). Bununla birlikte, bu tamamen beklenmedik değildi: pMMO'nun intrasitoplazmik zarlarda lokalize olduğu göz önüne alındığında, pMMO'nun daha fazla ekspresyonu ve aktivitesi bu zarların mantıksal olarak daha fazlasını gerektirir. Bununla birlikte, daha şaşırtıcı bir şekilde, pMMO'nun ve mxa operon tarafından kodlanan PQQ'ya bağlı MeDH'nin, intrasitoplazmik membranlara sabitlenmiş bir süper kompleks oluşturduğunu ve elektronun, PQQ-bağlantılı MeDH'den pMMO'ya In vivo metan oksidasyonu