15 Aralık 2017,Cuma
Anasayfa » Tag Archives: etkili

Tag Archives: etkili

Kısa Kıvırcık Saçlar İçin Etkili Stiller | Kısa Saç Stilleri 2016 – 2017

Kıvırcık saçlarınızı tekrar sevecek parlak saç kesimleri ve stil fikirleri var, bayanlar! Bazen kıvırcık saçların işlenmesi gerçekten zordur ve sonra bunları kısa süre kesersiniz … Ve sonra kıvırcık kısa saçlarınıza tarz verme konusunda endişeleniyorsunuz ve bu durumda biz yardımcı olacağız. kısa kıvrılmış saç modellerinizin en iyi yollarını bulacaksınız! Kafanızın üzerinde kıvrıldığınızda, kısa saç kesimlerinde ne kadar sevimli ve şık görüneceğinizi …

Devamını Oku »

Uyarıcı ilaçlar beynin dopamin nörotransmisyonunu şiddetlice artırır ve kronik kullanım mezolimbikte nöro-adaptif değişikliklere yol açar. [1945900] Dopamin sistemi ve bazal ganglia yapılarındaki morfolojik değişiklikler. Bu değişikliklerin altında yatan mekanizmalar hakkında çok az şey biliniyor, ancak klinik öncesi kanıtlar, dopamin sentezi ve depolamasında koenzim olan demirin aday arabulucu olabileceğini gösteriyor. Demir bazal gangliyonlarda yüksek konsantrasyonlarda bulunur ve uyarıcı ilaçlar demir homeostazını etkileyebilir. Kokain bağımlılığında görülen morfolojik beyin değişikliklerinin beyindeki ve çevredeki anormal demir düzenlenişiyle ilişkili olduğunu varsaydık. Kemik bağımlılığı olan 44 hasta ve 44 sağlıklı kontrolte kantitatif duyarlılık haritalaması ve çevredeki kan dolaşımındaki demir markörleri kullanılarak beyinde demir konsantrasyonu tespit edildi. Kokain bağımlısı bireyler, globus pallidus'unda, kokain kullanım süresi ile güçlü korelasyon gösteren aşırı demir birikimi ve kırmızı çekirdekte düşük demir seviyeleri ile ilişkili olan periferik hafif demir eksikliği gösterdi. Bulgularımız, kokain bağımlılığında demir bozukluğunun oluştuğunu ve bunun kronik kokain kullanımından kaynaklandığını ortaya koymaktadır. Bu bireylerde Putamen'in genişlemesi demir konsantrasyonlarıyla ilgisizdir ve bu durumun, sırasıyla kokain bağımlılığının yatkınlığını ve sonuçlarını yansıtan eş zamanlı ortaya çıkan morfolojik değişiklikler olduğunu ileri sürmektedir. Kokainin demir metabolizmasını etkilediği mekanizmaları anlamak, yeni terapötik hedefleri ortaya çıkarabilir ve kokain bağımlılığının progresyonuna ve tepkisine ek olarak, zayıflıkların biyolojik belirteçleri olarak beyindeki ve çevresindeki demir seviyelerinin değerini belirleyebilir. Giriş Uyarıcı uyuşturucu bağımlılığında yapılan nörobilimsel araştırmalar, bağımlılığın nörobiyolojisi konusundaki anlayışımızı geliştirmiştir. Bu gelişmeler henüz daha etkili tedavilere veya önleme stratejilerine dönüşmese de, bağımlılığın bir beyin bozukluğu olduğuna açıkça gösterdiler. 1 Bunun için kritik olan, morfolojik beyin değişikliklerinin uyarıcı ilaçlarla ilişkili olduğunun kanıtı olmuştur 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 Klinik öncesi hayvan modelleri, bu bağımlılığın, en sıklıkla uyarıcı madde bağımlısı bireylerde görülen putamenin genişlemesidir. Ventral striatumdaki dopamin D2 reseptöründeki uyarıcı maddeden kaynaklanan düşüşün direkt olarak dorsal striatumdaki (putamen) hacim artışı ile bağlantılı olduğu anormallik, ilaç etkilerinden kaynaklanmaktadır. 9 Bu, hipotezi Gönüllü uyuşturucu kullanımından zorlayıcı ilaç alımına davranışsal değişimdeki ventral-dorsal ilerleme 10 ve putamen hacminin artması transitin sinirsel bir alt tabakasını yansıtabilir Bağımlılık üzerine. Bununla birlikte, uyarıcı madde bağımlısı bireylerden etkilenmeyen birinci derece akrabalarında 5 ve obsesif kompulsif bozukluk (OKB) olan hastalarda 11 putamen genişlemesinin kısmen temsil edilebileceği düşünüldüğünden Zorlayıcı davranışlar için predispozan bir faktör. Bağımlılıktaki bu morfolojik beyin değişimleri iyi karakterize edilmiş olsa da, primer farmakolojik etkisi dopamin iletimini arttırmak olan uyarıcı ilaçların bu değişikliklere neden olduğu mekanizmaları bilinmemektedir. Potansiyel bir aday arabulucu, dopamin metabolizması ve depolanması için enerji sağlayarak dopamin sentezi de dahil olmak üzere birçok fizyolojik süreçte yaşamsal bir role sahip olan demir olabilir. 12 Demirin her ikisinde de oynadığı önemli rol göz önüne alındığında Sağlık ve hastalık, metabolizması çok sıkı düzenlenir. Temel bir mikro besin maddesi olan demir diyetten alınmalıdır ve atılabilir (kan kaybı hariç). Aşırı demir, reaktif oksijen türleri 13 üretimiyle nöronal ölümle sonuçlanabileceğinden ve demir eksikliği dopamin sentezini ve monoamin metabolizmasını etkiler. 14 Homeostaz Bu nedenle, çeşitli, oldukça karmaşık ulaşım sistemleri ve geribildirim döngüleri aracılığıyla dikkatlice kontrol edilir. 15, 16 Demiri düzenlemedeki bozulmalar bu nedenle çeşitli seviyelerde ortaya çıkabilir ve bunların arasında nörodejeneratif olan belirgin çeşitli patolojiler ortaya çıkabilir 17, 18 Demirin düzenlenmesinde kritik olan, kan-beyin bariyeri olup, çevresel demir düzeylerini beyinden ayırmaktadır. Demir, transferrin reseptörleri (TfR1) ve çift değerli metal taşıyıcı 1 (DMT1) yoluyla diferansiyel transferrin (Tf) olarak beyine girer. Transmbran proteini ferroportin 1, demiri luminalden abluminal yönde bir demir atomuna nakleder. 16, 20 burada ferritin olarak, esas olarak oligodendrositlerde, fakat aynı zamanda mikroglia ve astrositlerde depolanmaktadır. 21 Beyin, en çok metabolik açıdan aktif organlardan biri olduğu için Vücuda demir talebi genellikle transferrin alım oranını aşar, bu da stokların iç depolamadan düşürülmesi anlamına gelir. 22 Dahili deponun talebi karşılayabilmesini sağlamak için, İnflamasyon veya hipoksi olayı, beyin parankimindeki demir taşınımı, peptid hepcidin tarafından düzenlenir. 20, 23 Ancak demirin beyindeki bölgesel dağılımı eşit değildir. Bazal gangliyonlar gibi dopaminle zengin beyin bölgeleri özellikle demir birikimine açıktır, ancak demirin bölgesel dağılımını belirleyen faktörler halen kaçınılmazdır. 12 Çeşitli kanıtlar, demirin düzensizliğini Uyarıcı madde bağımlılığında homeostaz. İlk olarak uyarıcı ilaçların düzenli kullanılması kan-beyin bariyerinin geçirgenliğini arttırarak daha fazla demirin beyin parankimine girmesini sağlar. 13, 24 İkincisi, hayvan modellerinde uyarıcı maruziyetin demir ile ilişkili olduğu gösterilmiştir Esas olarak oligodendrositlerde bazal gangliyonlarda birikim. 25 Üçüncü olarak uyarıcı ilaçlar doğuştan gelen bağışıklığı bozuyor 26 kronik uyarıcı kullanıcıları enfeksiyona ve kronik enflamasyona karşı savunmasız hale getiriyor 27 rahatsız edici Demir emilimini veya heam sentezini azaltarak periferik demir homeostazını azaltır ve bu azalmış serum demir ve transferrin doygunluğuyla yansıtılır. 28 Son olarak, kronik uyarıcı ilaç kullanımı diyet tercihlerini özellikle yağlı gıdalara değiştirebilir 29 , 30, 31 demir taşıyıcı ve biyoyararlanım eksikliği nedeniyle demir absorpsiyonunu etkiliyor. Kokain bağımlılığının bozulma ile bağlantılı olduğunu varsaydık Bu, beyindeki demir konsantrasyonunun artması ve kandaki demir seviyesinin azalması ile yansıtılır. Bu nedenle, kantoksik bağımlılığı olan yaş ve sağlıklı kontrol gönüllüleri bulunan hastalarda, kantitatif duyarlılık haritalaması 32 ve çevresel olarak kan dolaşımındaki işaretleyicileri kullanarak beyindeki demir konsantrasyonunu belirlemeye çalıştık. Kokain bağımlısı hastalarda beyin demir seviyesinin artmasının kokain kullanım süresiyle ve bazal gangliyon hacmiyle ilişkili olacağını öngördük. Malzemeler ve yöntemler Kokain bağımlılığı için DSM-IV-TR ölçütlerini karşılayan, kronik bir kokain öyküsü olan 44 bireyi (% 95 erkek) ve 44 eşleştirilmiş sağlıklı kontrol gönüllüsünü (% 93'ü eşleştirilmiş) araştırdık Çalışma örneği ve prosedürleri Erkek) ilaç ya da alkol bağımlılığı öyküsü olmayan bir gruptur. Kokain bağımlılığı tanısı, DSM-IV için Yapısal Klinik Görüşme kullanılarak belirlendi ve bu kişilere daha sonra kokain kullanım bozukluğu (CUD) adı verildi. Kontrol katılımcılarından hiçbiri madde bağımlılığı için DSM-IV-TR kriterlerine hiç uymadı; Ayrıntılı bilgi için Ek Malzeme sayfasına bakınız. Bütün katılımcılar tıbbi bir gözden geçirme ve psikiyatrik taramadan önce yazılı bilgilendirilmiş onam vermiştir. Dışlama kriterleri, başlıca medikal veya nörolojik hastalık, psikotik bozukluğun ömür boyu öyküsü, travmatik bir kafa travması öyküsü ya da MR taramaya yönelik herhangi bir kontrendikasyon içermektedir. Diyetle alınan demir miktarı, Gıda Frekansı Anketi'nden (http://www.srl.cam.ac.uk/epic/nutmethod/FFQ.shtml) hesaplanmıştır. Demir absorpsiyonundaki diyetle ilgili varyasyonlar, Hallberg ve Hulthen tarafından geliştirilen algoritmalar kullanılarak tahmin edildi. 33 Tüm katılımcılar, serumdaki demir proteinlerinin (yani, ferritin, demir, transferrin), hepcidin'in -25, akut enflamasyon (yani C-reaktif protein (CRP)) ve hematolojik durum. Nörogörüntüleme veri toplama Tüm katılımcılar, manyetik rezonans beyin taramalarına tabi tutuldu (12 / EE / 0519, PI: KDE) 3T Siemens Magnetom Tim-Trio tarayıcısı kullanarak Cambridge Üniversitesi (İngiltere) Wolfson Beyin Görüntüleme Merkezi'nde. Tüm katılımcılar için T1 ağırlıklı görüntüler (MPRAGE) ve duyarlılık ağırlıklı görüntüler (SWI) elde edildi. Beyin taramaları nöroradyologlar tarafından normal radyolojik görünüm için tarandı. Bir kontrol katılımcısından ve üç CUD hastasından alınan veriler, kalitesizlik nedeniyle kaldırıldı ve toplam 84 katılımcı bırakıldı (43 kontrol, 41 CUD). Ayrıntılı beyin görüntüleme yöntemleri Ek Malzemede verilmektedir. İstatistiksel analiz Veriler aşağıda özetlenen beş adımlı bir strateji kullanılarak analiz edildi ve tam olarak açıklandı Ek Malzemede. Tüm istatistiki testler iki taraflıydı. Birden fazla istatistiksel testin ışığında ilk P eşik değerini (0.05) 10 olarak bölerek P değerini uyguladık ve sonuçta eşiğin P <0.005. Bununla birlikte, bu bir keşif analizi olduğu için, tartışmada önemli olarak değinilmemesine rağmen P <0.05 eşiğine ulaşan sonuçlar da bildirilmiştir. Demografik özellikler, klinik veriler ve periferik demir işaretleyicileri bağımsız örnek t testleri veya Mann-Whitney kullanılarak SPSS (v21) U -test. Kategorik veriler için ki-kare veya Fisher kesin testleri kullanıldı. Bütün beyin seviyesinde, gri madde hacmi karşılaştırmaları, permütasyon testi için FSL-VBM ve CamBA kullanılarak MPRAGE görüntülerinde yapıldı. Kantitatif duyarlılık haritaları (QSM), beyin demir konsantrasyonunun onaylanmış bir ölçüsüdür, 32 SWI verilerinden yeniden oluşturuldu. 34 Kısaca, çok kanallı karmaşık veriler değiştirilmiş uyarlamalı bir algoritma kullanılarak birleştirildi. [35] Birleştirilen faz görüntüleri sürekli bir Laplace yaklaşımıyla, 36 ve yerel alan küresel ortalama değer filtreleme ile arka plan alanının küresel ekstraksiyonu ile ortaya çıkmıştır. 37 QSM, morfolojik olarak etkin, doğrusal olmayan dipol inversiyon yöntemi, ile tahmin edilmiştir 38 ve haritalar daha önce tarif edilen bir işleme akışı ile çalışma açısından bir alana çarpıldı 34 ANT kullanan (v2.1). Son olarak, QSM istatistiksel analizi için FSL Randomize (v2.9) kullanılmıştır. Büyük grup farklılıklarının tüm beyin haritaları. ( a ) Tüm beyin seviyesinde modüle edilmiş gri cevher hacminin grup karşılaştırması. Mavi renkte olan vokseller, kokain kullanım bozukluğu (CUD) olan hastaların gri cevher hacmini azalttığı beyin bölgelerini gösterir QSM grubu şablonu üzerinde manuel olarak izlenen dokuz demir açısından zengin yapılar için ilgi bölgeleri (ROI'lar) tanımlandı. Buna ek olarak, putamen ve globus pallidus (GP) 'deki gri cevher olasılıklarına karşı QSM'yi doğrudan doğruya karşılaştırmak için, FSL-FIRST (ve)' yi kullanarak MPRAGE şablonuna subkortikal segmentasyon için otomatik ve tekrarlanabilir bir algoritma uyguladık. Her ROI için ortalama ve medyan değerler, grup karşılaştırması ve korelasyon analizi için SPSS'ye aktarıldı. Demir konsantrasyonundaki bölgesel grup farklılıkları. ( a ) Demir açısından zengin beyin bölgelerinin ilgi alanındaki (ROI) tabanlı bir yaklaşımdaki demir konsantrasyonunun grup karşılaştırması. CUD hastaları globus pallidusunda% 14'lük QSM'de anlamlı bir artış gösterdi ] Kokainle ilgili anormallikler. ( a ) İlgi alanımız olan globus pallidus'un (GP) illüstrasyonu. ( b ) GPe'deki demir konsantrasyonunun post-hoc karşılaştırması, CUD hastalarında QSM düzeyleri … Olası önceden var olan anormallikler. ( a ) İlgilendiğimiz bölgemiz olan putaemin illüstrasyonu. ( b ) Gri cevher hacminin grup karşılaştırmaları, CUD hastalarında kontrollerle karşılaştırıldığında belirgin bir artış gösterdi. [ c ) KSÇ Seviyeleri Ölçülebilir Değil … Korelasyon analizi ayrı olarak gerçekleştirildi Beyin yapısı, yaşı ve kokain kullanım süresi ile beyin ve çevresindeki demir konsantrasyonu arasındaki ilişkileri incelemek için her bir grupta değerlendirildi. GP'de demir konsantrasyonunun öngörücüleri, DSM-IV uyuşturucu bağımlılığı durumuna, sigara içme durumuna, serum ferritin ve transferrin saturasyonuna sahip SPSS'deki çoklu regresyon modeli, prediktör değişkenleri olarak dahil edilmiştir.

Sonuçlar Demografik veriler ve periferik demir işaretleyicileri İki grup yaş, cinsiyet, el koyma, vücut kütlesi ve alkol tüketimi açısından eşleştirildi (). Gruplar yaşamsal bulgular bakımından farklı değildi, bu da CUD hastalarının şiddetli sarhoş olmadığını gösterdi.

Devamını Oku »

İplik firması etkili ilaçların marka haline gelmesine yardımcı oluyor …

                                                                                                          Kredi: Swansea Üniversitesi      Daha iyi ilaçları daha hızlı ve daha düşük maliyetle pazara sunmak, bir Swansea Üniversitesi spin-out şirketi tarafından geliştirilmekte olan test sürecini hızlandıran teknoloji sayesinde bir adım daha yakındır , Molekülomik.                                                                                 Şirket, insan vücudundaki protein yapıları için bilgisayar tarafından üretilen kapsamlı platformlar geliştiriyor. En son yüksek performanslı bilgi …

Devamını Oku »

Kellik Oluşumu Sonucunda Kullanılan Etkili Yöntemler

Saç dökülmesi demir eksikliği veya tiroit bezlerinin dengesiz bir şekilde çalışması, kanser gibi ağır hastalıklar neticesinde de etkin bir saç kaybı yaşanabilmektedir. Hastalığımız için kullandığımız bazı ilaçların yan etkileri de saç dökülmesine neden olabilmektedir. Saç dökülmesi fizyolojik nedenlerin yanı sıra psikolojik etkenler giving kişi kaybı saç kaybı oluşturmaktadır. Stres ve sıkıntıya bağlı ağır psikolojik travmalar kişinin ruhsal yapısını bozarak ve …

Devamını Oku »

19F-NMR, Mo'nin Rolünü ortaya çıkarır … β-laktamaz antibiyotiklerine direncin en önemli mekanizmalarından biri olan β-laktamazlar tarafından katalizlenen hidroliz. [1] Her ne kadar β-laktamazlar, Bir nükleofilik serin (sınıf A, C ve D), β-laktamlara dirençli olarak iyi bilinen roller taşımaktadır; B sınıfı Zn II'ye bağımlı metallo-β-laktamazlar (MBL'ler) daha yakın zamanda ortaya çıkmıştır Önemli bir klinik problemdir (Şekil ). A sınıfı β-laktamazların (örn klavulanik asit) klinik olarak yararlı önleyicileri yaygın olarak kullanılmaktadır ve avibactam'ın yakın zamanda geniş spektrumlu bir serin β-laktamaz inhibitörü olduğu bildirilmiştir; Bununla birlikte, MBL'ler için böyle bir inhibitör mevcut değildir.4 A) Metalo-β-laktamazlar (MBL'ler) için anahat mekanizması. B'de "açık" (PDB ID: 2FHX) 8a ve C "kapalı" (PDB ID: 4BP0) 8b konformasyonları … ] São Paulo MBL-1 (SPM-1) ilk olarak β-laktam dirençli Pseudomonas aeruginosa 5 ve SPM-1 üreten P'de tanımlandı. Aeruginosa Brezilya hastanelerinde endemiktir.6 Avrupa, Asya ve Kuzey Amerika'da SPM-1 aracılı dirençle ilgili yakın tarihli raporlar, küresel yayılımını ortaya koymaktadır.7 SPM-1, inhibisyon perspektifinden dolayı belirli bir zorluktur; Substrat özgüllüğü (penisilin, sefalosporin ve karbapenem hidrolizi katalizörü) hem B1 hem de B2 alt aileye ait MBL'lere karakteristik özelliklere sahiptir (Şekil 1, Destekleyici Bilgi). 8 SPM-1, di-Zn II iyon gereksinimi ve (mevcut kanıtlara dayalı olarak) kinetiğine göre 9 SPM-1 olağandışı ikinci küre kalıntılarına 10 sahiptir ve mobil aktif bölge bölgelerine göre B1 MBL'ler arasında benzersizdir; SPM-1, B2 MBL'lerin karakteristik özelliklerini oluşturan genişletilmiş bir "α3 bölgesi" (kalıntılar 223-241, BBL numaralandırma) ve nispeten kısa bir L3 döngüsüne (kalıntılar 61-66, BBL numaralandırma) sahiptir.8a SPM-1'in yapıları yoktur Substratlar / önleyiciler ile kompleksleşmiş halde, α3 bölgesinin aktif bölgeye göre open8a ve closed8b konformasyonlar benimsediği yapılar bildirilmiştir (Şekil B, C). İçerdiği Duyarlılık, rezonans eksikliği ve NMR cihazlarındaki ilerlemeler ve prob tasarımı, protein gözlemleme 19 F-NMR (PrOF NMR) konformasyonel değişiklikler ve protein-ligand etkileşimleri incelenirken artan bir yarar sağlar. , Verimli bir şekilde flor etiketleri (Şekil S2A) .8b, 12 tanıtmak için 3-bromo-1,1,1-trifloroaseton (BTFA) tarafından sistein alkilasyon kullanarak MBL dinamikleri incelemek için PrOF NMR kullanımı hakkında rapor Burada, biz PrOF NMR çalışmaları Göreceli imp hakkında bilgi veren SPM-1 Farklı sınıflarda MBL substratlarının / inhibitörlerinin bağlanmasında L3 döngüsü ve α3 bölgesinin ortansı. Önemlisi, MBL katalizörünün hidrolize β-amino asit ürünlerinin, L3 döngüsünü içeren bir süreçte SPM-1'e bağlanabileceğini ortaya koymaktadır. L3 döngüsünde (Y58) ve α3 bölgesindeki (F151) rezidüler 19 F ile değiştirme ve etiketleme için seçilmiştir (Şekil S2B). İlk çalışmada biz Y152; 8b'yi etiketledik, ancak daha ileri çalışmalar için F151'i seçtik, çünkü SPM-1 kristal yapılarının analizi8 F151 yan zincirinin hareketli olduğunu ve Tyr152'ninkinden daha aktif alan çinko iyonlarına yakın projeleri ima ettiğini gösterir (Şekil S3 ). BTFA (sırasıyla Y58C * ve F151C *) kullanılarak Y58C ve F151C SPM-1 varyantlarının selektif etiketlenmesi intakt protein ve tripsin-digest kütle spektrometrisi ile doğrulanmıştır (Şekil S4-11). Dikkat çekici olarak, SPM-1'deki doğal olarak var olan sistein (Cys221), BTF ile reaksiyon göstermedi, muhtemelen Cys221'in karbamidometilasyonu ile kanıtlandığı üzere Zn II'yi kenetlediği için Y58C * ve F151C * 'nin MS analizlerinde Cys58 ve Cys151 değil (Şekiller S8-11). Yabani tip (wt) SPM-1, Y58C * ve F151C * 'nin dairesel dikroizm spektrumları13 benzerdi (Şekil S12), dolayısıyla Y58C'nin kristalografik analizleri ile desteklenen benzer toplam kıvrımları ima eder (Şekil S13,14 ve Tablo S1). Kinetik analizler14 (Şekil S15), CH 3 COCF 3 etiketinin eklenmesinin substrat afinitesini büyük ölçüde değiştirmediğini, yani benzer wt SPM-1 ve her ikisi de etiketli varyant ile meropen için M değerleri elde edildi. k 'nin 2.5 kat azalması, Her iki SPM-1 * varyantı ile meropenem için kedi muhtemelen enzim-ara komplekslerinde modifiye edilmiş kalıntıyı içeren etkileşimleri yansıtmaktadır. Kombine biyofiziksel ve kinetik çalışmalar, Y58C * ve F151C * 'nin özelliklerinin, PrOF NMR çalışmalarını haklı çıkarmak için ağırlıkça SPM-1'e yeterince benzediğini ortaya koymuştur. BTFA'nın protein alkilasyonuyla ilgili önceki çalışmalarla birlikte bu sonuçlar, BTFA'nın, translasyon sonrası sistein alkilasyonu yoluyla 19 F etiketlerinin etkili bir şekilde verilmesi için kullanışlı olduğunu ortaya koymaktadır. 19 F-NMR spektrumları, -83.15 ppm'de (Y58C *) ve -84.75 ppm'de (F151C *; Şekil S16) ana protein gözlem tepeleri ortaya çıkardı ve böylece varyantların işaretlenmiş halkaları / bölgeleri ağırlıklı olarak tek bir konformasyonda mevcut olduğunu gösterdi Veya daha muhtemel olarak, etiketli kalıntıların NMR kaydırma zaman ölçeğine göre hızla ilerlediğini görürsünüz. F151C * varyantı, muhtemelen konformasyonel hareketi yansıtan -84.75 ppm'de daha keskin zirvelerin her iki tarafında da geniş sinyaller verdi; Bununla birlikte, değişken sıcaklık çalışmalarında (277 K – 310 K) sinyalin çizgi genişliğinde ve yoğunluğunda değişiklikler gözlemedik. Kristalografik kanıtlarla uyumlu olarak, solvent izotop değişim çalışmaları (Şekil S17) maruz kalan α3 bölgesinde bulunan F151C * 'nin, daha az maruz kalan L3 döngüsünde bulunan Y58C *' ye daha kolay çözülebilir olduğunu ortaya koymuştur. Daha sonra temsili MBL ligandlarının Y58C * ve F151C * SPM-1'e bağlanmasını araştırmak için PrOF NMR (Şekil S18) kullandık (Tablo S2, K için Tablo S3'e bakınız) D değerleri). Başlangıçta, ligand bağlanmasını araştırmak için SPM-1 * varyantlarının kullanımını doğrulamak için rapor edilen MBL inhibitörlerini test ettik. Çinko kenetleme maddesi 1,10- o -fenantrolin ile hem Y58C * (Şekil A) hem de F151C * (Şekil 19459005) B) için yeni NMR tepeleri gözlemlendi. Bu zirveler, çözeltide 1,10- ile tahmin edilen Zn II ekstraksiyonuyla tutarlı olan apo -SPM-1 * spektrumunda gözlemlenenlerle aynıdır. -fenantrolin; 1,10- o -fenantrolinin kendisinin apo [Madde -Y58C * (Şekil 19459005) A ve Şekiller S19,20'ye bağlandığı gözlemlenmemiştir. Bu sonuçlar, metalo-enzim inhibisyon çalışmaları yoluyla her zaman kolayca erişilemeyen çözelti ve / veya protein içindeki metal şelasyon / bağlanmanın tespit edilmesinde PrOF NMR'nin faydasını ortaya koymaktadır. Rodanin ML302 ve tioenol ML302F ile, sırasıyla, Y58C * ve-F151C * için -83.75 ppm ve -84.40 ppm'de 16 yeni zirve gözlendi (Şekil S21). Bu gözlemler, kuluçka koşulları altında tioenol ML302F'yi vermek üzere ML302'nin hidrolizi ile tutarlıdır.17 -1 MBH'leri inhibe eden, ancak SPM-1'i (IC505) inhibe eden -Captopril,> 500 μ m 18 ve alt sınıf B2 MBL'leri 19, önemli değil SPM-1 * varyantlarının herhangi biri için 19 F spektrumundaki değişiklikler (Şekil S22). SPM-1 * 'e bağlanan inhibitörün PrOF NMR monitörizasyonu. 19 1,10- -fenantrolinin A) Y58C * SPM-1 ve B) F151C * SPM-1 ile etkileşimlerinin F-NMR spektrumları. 19 … 'nin F-NMR spektrumu. İzokinoller, geniş spektrumlu MBL inhibitörleri, 13,14, ancak bağlayıcılarıdır Modu bilinmiyor. İzokinolin ( 1 ) 13, 14'ün Y58C * ile titre edildiğinde, ara değişimde bir sistemin tipik olan önemli çizgi genişlemesi gözlemlendi. ML302F17'nin Y58C * ve 1'i içeren bir numuneye eklenmesi, ML302F'ye bağlı kompleksin zirve karakteristik özelliğinin ortaya çıkmasına ve Y58C * zirvesine göre 1.1 ppm ile deshield edilen yeni bir zirvesinin ortaya çıkmasına yol açtı (Şekil C). F151C * ile, 1 genişleme ve kimyasal kayma değişiklikleri indükledi (Şekil D). Böylece, 1 'nın bağlanması hem α3 hem de L3 bölgelerini etkiler (Şekil S22-24). Bununla birlikte, ilginç bir şekilde sonuçlar, 1'in aktif saha çinko iyonlarına bağlandığı bilinen ML302F'nin varlığında SPM-1'e bağlandığını ima etmektedir.17 Bu gözlem ile birlikte ]Çizginin genişlemesi ile (Şekil 19459005) gösterildiği gibi apo -Y58C * 'ya bağlanır; sonuçlar, SPM-1'e benzeri görülmemiş şekilde bağlanıp eklenmediğini ima eder Sonra, sınıf A, C'yi ve bazı Dp-laktamazları inhibe eden avibactam ile örneklenen zayıf SPM-1 inhibitörlerinin bağlanmasını izlemek için PrOF NMR'nin yararını test ettik, 3b, 4c'ye sahip ancak çoğu MBL için afinitesi düşüktür.4b Avibactam ve Y58C * ile açık bir kimyasal kayma değişikliği gözlemlendi, bu nedenle avibactam bağlanmasının L3 bölgesinde ancak α3 bölgesindeki değişiklikleri indüklediğini gösterdi (Şekil S25, 26). Y58C * ile muhtemelen orijinal protein zirvesine geri dönüş, muhtemelen SPM-1.4b ile katalize edilen avıbactamın yavaş hidrolizinin bir sonucu olarak gözlendi Reaksiyona giren solüsyona yeni avibactam ilavesi, tepeyi orijinal olarak avibactam'dan doğana doğru kaydırdı Sonra, β-laktam substratlarının [a carbapenem (meropenem), a penicillin (piperacillin), and mechanism‐based inhibitors of class A β‐lactamases (tazobactam and clavulanic acid)] SPM-1 * varyantlarına eklenmesini araştırdık. Onların SPM-1 * 'e ilavesi, Y58C * için çizgi genişletme ve kimyasal değişim değişikliklerine neden olurken, F151C * (Şekil) için 825 meropenem muamelesi (400 μ m ) (saptama limitleri dahilinde değil) * Y58C * 40 μ m ), 0,2 ppm 19 F kaydırmasına (-83.15 ppm'den -82.95 ppm'ye) yol açtı ve böylece hızlı değişim (Şekil 19459005) A, E gösterildi. Zaman-kurs analizi 12 saat boyunca kararlı olan spektrumları ortaya çıkarmıştır (Şekil 19459005). Bu durumda yeni zirveye muhtemelen bir enzim ürünü kompleksini yansıttığını düşündürmektedir (Şekil S27-31). Piperacillin (400 μ m ) ile 0.4 ppm'lik bir kayma da gözlenmiştir (Şekil B, F). Bununla birlikte, meropenem'in aksine, zaman-gidiş analizi, ilave çizgi genişlemesi ve -82.75 ppm'den -82.57 ppm'e (Şekil D ve Şekil S32) ürün karmaşık zirvesine göre 0.18 ppm'lik bir başka kimyasal kayma ortaya koymuştur; bu nedenle, Yeni bir SPM-1 bağlanma türünün üretilmesi. PrOF NMR ile analiz edildiği gibi (hidrolize edilmiş) β-laktamların SPM-1 * varyantlarıyla olan etkileşimleri. A) meropenem ve B) piperasilinin Y58C * SPM-1 ile titrasyonu, L3 bölgesi ile etkileşimleri ortaya koymaktadır. Önceki çalışma, piperacillin hidroliz ürününün penisilin-bağlayıcı proteinlere, "epimerize" protein ile bağlanabileceğini ortaya koydu. Başlangıçta oluşan (5 (19459020)] – penisiloik asite (PA) tercih edilene göre ürün bağlanmasıdır. Böylece, 1 'yı kullandık.' H NMR'den Piperasilinin zaman bağımlı SPM-1 ile katalize edilen hidrolizini değerlendirir (Şekil S33). Sonuçlar SPM-1'in piperasilin hidrolizini katalize ederek muhtemelen bir enzim haricinde (5 – ) – PA verecek şekilde nispeten yavaş epimerize olan (5 ) – PA'yi vermesi için katalizlendiğini ortaya koymaktadır Katalizli yol. (5 (19459019) S ) -PA ve SPM-1'e bağlanmayı araştırmak için, Bacillus cereus [BcIIMBL14PADahasonrasaflaştırılmıştırSonuçtakiY58C*karışımınailaveedilenpiperasilinzamanperiyodunda12saatsonragözlemlendiğigibi-8257ppm'debirzirveyeyolaçan(PA52C*'ye)(Şekil) 1 H ve su LOGSY analizleri, her ikisinin de (5 (19459020) PA ve (5A) SPM-1'e bağlanmasını ortaya çıkarmıştır (Şekil S34). 19 Hidrolize piperacillin ile etkileşen Y58C * SPM-1'in F-NMR spektrumları. Piperasilin ve hidrolize ürünlerin yapıları [5(19459019)R) – PA ve 5 (19459020] – PA] yapıları gösterilmektedir. Deney karışımları: 40 μ m Y58C * SPM-1

Daha sonra PrOF NMR'yi, SPM-1 substratları olan A sınıfı SBL inhibitörleri klavulanik asit ve tazobaktam ile SPM-1.89 Hat büyütme ve -83.15'den -83.02 ve -82.98 ppm'e geçiş, 19 F Y58C'de Sırasıyla tazobaktam ve klavulanik asit tayfları; 12 saat sonra başka hiçbir önemli değişiklik görülmedi. F151C * için böyle bir etki görülmedi (Şekil S35-39). Klavulanik asit ve tazobaktamın kompleks parçalanmaya uğradığı eğilimi21 …

Devamını Oku »

Arka bahçe sıska dipperleri kee için etkili kanunlardan yoksun …

                                                                                                          Yeni teknolojiler Tom'ları gözetlemek için her zamankinden daha kolay hale getiriyor – ve yasalar onları durdurmak için pek yardımcı olmuyor. Kredi: Gisele Porcaro / Vikipedi Commons, CC BY      Teknolojideki son gelişmeler, gizliliğimizi korumak için artık evlerimizin etrafındaki çitler veya engellere güvenemediğimiz anlamına geliyor. Salı günü ABC'nin Hukuk Raporu'nda bir dronun banliyö arka bahçesinin …

Devamını Oku »

Koruma azaltmak için etkili bir araç değil …

                                                                                                          Zebralar Kenya'nın Nairobi Milli Parkı'ndalar. Kredi: Dan Salkeld      Ormanları koruyan ve bitki ve hayvan çeşitliliğini teşvik eden koruma projeleri insanlara birçok yararlar sağlayabilir.                                                                                 Fakat iyileştirilmiş insan sağlığı bu yararlar arasında değildir – en azından sağlık bulaşıcı hastalık objektifiyle ölçülürken. Bulaşıcı hastalıklar ile 20 yıldan fazla düzinelerce ülkedeki çevresel, demografik ve …

Devamını Oku »

Etkili bir deneyim …

Geniş kapsamlı ilaç dirençli (XDR) tüberküloz (TB), çoklu ilaca dirençli (MDR) TB türüdür. Isoniazid, rifampisin, florokinolonlar ve en az bir enjektabl ikinci hat ilaç direnci. Etkili kombinasyon tedavisi için antibiyotikler yetersizdir ve mortalite% 70'i aşmaktadır [1]. 2013'te başarılı faz IIb denemelerinin ardından [2]yeni mikobakteriyel ATP-sentaz inhibitörü bedaquiline, Dünya Sağlık Örgütü (WHO) tarafından onaylanmış bir iyileştirilmiş arka planın yanında MDR / …

Devamını Oku »

21 Küçük ama Son derece Etkili Yollar

Pexels / Porapak Apichodilok Dünya Günü (22 Nisan) unutulmuş gibi görünüyor gün. Herkes kardeşlerinin resimlerini #NationalSiblingDay'da veya köpeği #NationalPetDay'da yayınlar, ancak hiç kimse #EarthDay için resim yayınlamaz. Dünya olmadan, burada olmazdık ve gezegeni her zamankinden daha hızlı yok edeceğiz. Sorun şu: Çoğu insanın "iyi ah, o zaman öldüğüm" zihniyetleri var ve alışkanlıklarını değiştirmeyin. Dürüst olmak gerekirse, haklı olabilirler ama yaşadığınız …

Devamını Oku »

Vücudunuza göre giyinmeniz için etkili ipuçları

<! – düzenle 3: Bir sonraki reklam alanına yalnızca yazı içeriğinde sayfanın bir sonraki sayfaya gelinmesi. Bu alan şu bir reklamla boş bir alan gözükmeyecektir. Zaten reklam koymayacağım diyorsanız bir şey yaprağı yok. Eğer reklamın koyacağım derseniz ise alanın doğru olduğu ve önereceğiniz bilgiler. Açıklamaları okumaya devam ediniz: Eğer siz de bu konuda reklam yayınlamayı düşünürseniz Öncelikle 2 satır ve …

Devamını Oku »

RNA helikazları, RNA yapılarını modüle etmek ve RNA-protein (RNP) kompleks montajını kolaylaştırmada temel roller oynamaktadır ] In vivo . Daha önceleri, laboratuarımızda S'de DEAD-box RNA helikaz Dbp2 gösterildi. Cerevisiae ko-transkripsiyonel olarak ilişkili mRNA'ya bağlanan protein Yra1, Nab2 ve Mex67'nin poli (A) + RNA üzerine etkili bir şekilde birleştirilmesini teşvik etmek için gereklidir. Ayrıca, Yra1'in doğrudan Dbp2 ile ilişkili olduğunu ve Dbp2'nin çözülme ve inhibisyon döngüsünü düşündüren Dbp2'ye bağlı dupleks çözme inhibitörü olarak işlev gördüğünü bulduk. Bunu test etmek için birlikte transkripsiyonel mRNP montajında ​​Dbp2 olaylarının sırasını aydınlatmak için bir dizi deney yaptık. Şimdi, Dbp2'nin RNA yoluyla kromatin içine alındığını ve Yra1 ve Mex67 ile geniş, RNA'ya bağlı bir kompleks oluşturduğunu gösteriyoruz. Dahası, tek moleküllü (smFRET) ve toplu biyokimyasal analizler, Yra1'in Dbp2'nin tek sarmallı RNA ile ilişkisini engelleyerek konsantrasyona bağlı bir tarzda çözmeyi engellediğini göstermektedir. Bu inhibisyon, Dbp2'nin mRNA üzerinde aşırı birikmesini ve RNA Pol II transkriptlerinin bir alt grubunun stabilize edilmesini önler. Yra1'in, mRNA'nın bir araya getirme işlemini Dbp2 ile sonlandırdığı bir model öneriyoruz. Anahtar kelimeler: DEAD-box, helicase, RNA-Protein kompleksi, kromatin, RNA [Giriş Gen ifadesi sayısız, koreografi yapılan basamakları içeren son derece karmaşık bir süreçtir . Giriş Ökaryotlarda transkripsiyon sırasında, yeni sentezlenmiş haberci RNA'ya (mRNA), nükleer ihracat ve çeviriden önce 5 'kapak, ekleme ve 3' son oluşumu da dahil olmak üzere çeşitli birbirine yakından bağlantılı işleme olaylarına rastlanır [1–3]. Bu adımların her biri boyunca, mRNA, her olgunlaşma evresinde kompozisyonu sürekli değişen haberci ribonükleoprotein kompleksleri (mRNP) oluşturmak için RNA-bağlayıcı proteinlerle bağlanır [4]. Uygun mRNP oluşumu gen ekspresyonu için kritiktir ve uygun biyolojik zaman noktasında doğru yapılandırılmış mRNA gerektirir [2,5]. Fiziksel özelliklerine bakıldığında, RNA molekülleri, uzun ömürlü ve alternatif konformasyonları açıp tekrar konrol etmek için büyük miktarda enerjiye ihtiyaç duyan kararlı ikincil yapılar oluşturma eğilimindedir [6,7]. Bu, hücrelerdeki RNA yapısal dönüşümlerini hızlandıran proteinlere ihtiyaç duyar. Tomurcuklanan mayada S. Cerevisiae mRNA, anormal yapıların oluşumunu önlemek için aktif mekanizmaların dahil edilmesini düşündüren, termodinamik tahminlerden farklı olarak in vivo olarak . Sürekli olarak, mayalanma maymundaki ATP tükenmesi, mRNA'da artmış sekonder yapıya neden olur [2]. Dahası, mRNA sekonder yapısının son genom analizleri, yapısal sapmaların gen regülasyonunu değiştirebileceğini gösteren düzenleyici bölgelerdeki tek nükleotid polimorfizmleri ile değiştirilmiş RNA yapısı (yani, miRNA-bağlanma alanları) arasında çarpıcı bir korelasyon bulmuştur Hücresel mRNA'ların yapısal yeniden düzenlenmesi için olası adaylar, RNA çözen veya RNA-protein (RNP) yeniden şekillendirme enzimleri olarak işlev gören ATP'ye bağımlı RNA helikazlarıdır [10,11]. DEAD-box proteinleri insan hücrelerinde yaklaşık 40 üyeyle (mayada 25) RNA helikaz familyasındaki en büyük enzim sınıfını oluştururlar. Bu sınıfın üyeleri, yaşamın tüm alanlarında bakterilerden memelilere kadar her yerde bulunur ve pre-mRNP meclisi [12] dahil olmak üzere RNA metabolizmasının her alanında yer alırlar. Örneğin, insan Tau proteinini kodlayan pre-mRNA'nın alternatif bağlanması, ekzon 10'un 5 'ek yeri [13]' in aşağısındaki bir kök-ilmek yapısıyla düzenlenir. U1 snRNP'nin tau ekzonunun 5 'ekleme sitesine erişebilmesi için, bu kök-döngünün DEAD-proteini DDX5 [13] tarafından çözülmesi gerekir. tau genindeki eklemenin yanlış düzenlenmesi, demans ile ilişkilidir ve doğru gen ifadesi için yeniden modellemenin önemini vurgulamaktadır [14,15]. Bununla birlikte, pre-mRNA / mRNA yeniden şekillendirme biyokimyasal mekanizması (lar) ımız konusundaki anlayışımız, birlikte transkripsiyonel süreçlerin karmaşık ve oldukça birbirine bağımlı doğası nedeniyle engellenmiştir. Dahası, bireysel DEAD-kutusu protein ailesi üyeleri, düzenleyici yardımcı proteinlerin verdiği biyolojik fonksiyonların çeşitlendirilmesiyle birlikte RNA tavlama, nükleotid algılama ve RNP yeniden biçimlendirme dahil olmak üzere geniş biyokimyasal farklı aktiviteler sergilemektedir S. DDX5'in cerevisiae ortologu Dbp2 [19] 'dır. Laboratuvarımız daha önce, Dbp2'nin kromatin kopyalama ile ilişkili olan aktif bir ATPaz ve RNA helikazının olduğunu tespit etmiştir [17,20]. Üstelik mRNA'ya bağlanan protein Yra1 ve Nab2'nin yanı sıra mRNA ihracat reseptörü Mex67'nin mRNA üzerine birleştirilmesi için Dbp2 gereklidir [17]. İlginç olarak, Yra1 doğrudan Dbp2 ile etkileşime girer ve bu etkileşim, Yra1'in Dbp2'nin çözülmesini kısıtladığını gösteren çoklu döngü, toplu analizlerde Dbp2'nin çözülmesini engeller [17]. Bununla birlikte, Yra1'e bağlı inhibisyonun mekanizması ve biyolojik rolü anlaşılamamıştır. Biyokimyasal, moleküler biyoloji ve biyofiziksel yöntemlerin bir kombinasyonunu kullanarak, şimdi Yra1'in Dbp2'nin aktivitesini -transkripsiyonel mRNP montaj adımları. Bu inhibisyon, transkript seviyelerinin bakımı için önemlidir in vivo . Tek moleküllü (sm) FRET ve floresan anizotropi çalışmaları, Yra1'in Dbp2'nin RNA ile ilişkisini önleyerek Dbp2'nin çözülmesini engellediğini göstermektedir. Sürekli olarak, maya hücrelerindeki Yra1-Dbp2 etkileşiminin kaybı, mRNA üzerinde Dbp2'nin transkripsiyon sonrası birikmesine neden olur. Birlikte ele alındığında, bu, Yra1'in in vivo olarak Dbp2'ye bağımlı mRNP birleşiminin bir döngüsünü sonlandırdığını düşündürmektedir

Sonuçlar Dbp2 işe alındı DEAD-box RNA helikaz Dbp2 ağırlıklı olarak aktif olarak transkripsiyona uğramış genler ile çekirdekte lokalizedir [20–23]. Dbp2'nin başlangıçtaki RNA aracılığıyla kromatin ile işe alınıp alınmadığını belirlemek için, RNaz ile veya olmadan RNase ile kromatin immünopresipitasyon (ChIP) analizleri yaptık [24]. Kısaca, endojen DBP2 kodlama bölgesinin 3 'ucuna kaynaşmış bir 3XFLAG epitop etiketi barındıran maya hücreleri, bilinen gen olan …

Devamını Oku »

En Etkili Saç Ekimi Yöntemi

Özellikle erkeklerin en büyük korkularının biri olan saç kaybı problemleri mineral eksikliği veya genetik nedenler ile ortaya çıkabilmektedir. Saç dökülmelerinde uygulanan tedavi yöntemi kişide görülen saç dökülmesinin nedenine göre belirlenmektedir. Tıpta yaşanan gelişmeler sağlık sorunlarının etkili çözümü ve saç kaybı yüzünden estetik açıdan güven kaybı yaşayan kişilerinde bu tür kusurlarını ortadan kaldırmalarına yardımcı olmaktadır. Saç dökülmesi vücuda gelmiş minerallerin eksikliğinden …

Devamını Oku »

Erken galaksilerde daha az etkili olan karanlık madde …

                                                                                                          Eski Evrendeki (sağdaki) ve günümüzdeki (solda) dönen disk galaksilerinin şematik gösterimi. ESO'nun Çok Büyük Teleskobu ile yapılan gözlemler, Evrenin başlarındaki bu büyük yıldız oluşturan disk galaksilerinin daha az konsantre olduğu için karanlık maddelerden (kırmızı renkte gösterildi) daha az etkilendiğini düşündürmektedir. Sonuç olarak, uzak galaksilerin dış kısımları, yerel Evrende karşılaştırılabilir galaksi bölgelerine göre daha yavaş …

Devamını Oku »

Tubercu'nun Küresel Epidemiyolojisi … Etkili kemoterapinin varlığına rağmen, tüberküloz (TB) 2012'de 1.3 milyon insanı öldürdü. HIV ile birlikte, Enfeksiyöz bir hastalığın ölüm nedeninin başında gelir. TBC'nin epidemiyolojik yükünün azaltılması için küresel hedefler, Binyıl Kalkınma Hedefleri (Binyıl Kalkınma Hedefleri) ve Stop TB Ortaklığı bağlamında 2015 ve 2050 yılları için belirlenmiştir. Bu hedeflere ulaşmak, Tütün kontrolü konusunda ulusal ve uluslararası çabaların odak noktasındadır ve elde edilip edilmediğini göstermek, gelecekteki ve sürdürülebilir yatırımlara rehberlik etmek için büyük önem taşımaktadır. Bu makale, TB hastalığının yükünü tahmin etmek için veri kaynakları hakkında kısa bir bakış sunar; 2012 yılında TB insidansı, prevalans ve mortalite tahminlerini ve 1990 yılından bu yana eğilimlere ve 2015 yılına kadar projeksiyonlara dayalı olarak bu göstergelerdeki düşüşler için 2015 hedeflerine yönelik bir ilerlemenin değerlendirmesini sunar; TB bildiriminde ve Stop TB Stratejisinin uygulanmasında eğilimleri analiz eder; Ve 2015'ten sonra TBC'nin ortadan kaldırılma ihtimalini göz önünde bulundurmaktadır. Tüberküloz (TB), insanlar için tarihlerinin çoğunu etkilemiş olabilir (Holloway ve ark., 2011; Comas ve ark. 2013) ve 50 yılı aşkın süredir etkili ve uygun fiyatlı kemoterapi bulgusuna rağmen dünya çapında ölümün ana nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir. 2012'de (WHO 2013a) 1,3 milyon TB ölümle (HIV pozitif kişilerde TB ölümleri dahil), TB ve insan bağışıklık yetersizliği virüsü (HIV) dünya üzerindeki tek bir bulaşıcı ajandan ölümün en büyük nedenidir (Lozano ve ark., 2012; Ortblad ve diğerleri, 2013). TB, en ekonomik olarak üretken yaş gruplarında ve HIV ile yaşayan insanlarda önde gelen bir katildir (Lopez ve ark. 2006) ve TB'den sağlanan iyileştirmeler bile hayat kalitesini önemli derecede azaltan yaşam boyu sekellerle bırakılabilir (Miller ve ark. 2009). Bu gerçeklerin tanınması, 1990'ların başından bu yana TBC kontrolünü uluslararası toplum sağlığı gündeminde yüksek tutmuştur (Zumla ve diğerleri 2009; Lienhardt ve diğerleri 2012a), 1980'ler boyunca yıllarca ihmal edildikten sonra (Raviglione ve Pio 2002). Kemoterapinin, tüm sağlık bakım müdahalelerinden en uygun maliyetli olanı (Murray ve diğerleri 1991; Dye and Floyd 2006), HIV epidemisinin Afrika'daki TB üzerindeki katastrofik etkileri ve Çoklu ilaca dirençli TB'nin (ÇİD-TB) büyümesi, TB önleme ve kontrolünün iyileştirilmesine olan ihtiyacı vurgulamıştır. TBC'nin epidemiyolojik yükünün azaltılmasına yönelik küresel hedefler, 2015 ve 2050 yılları için Binyıl Kalkınma Hedefleri (BKH) bağlamında ve ayrıca uluslararası çabaları koordine etmek için kurulan paydaşların küresel bir koalisyonu olan TBT Ortaklığı tarafından belirlenmiştir (Kutu 1) . DSÖ'nün bu hedeflere ulaşması için önerilen yaklaşım, aktif TB bulunan hastaların tanı ve tedavisinde en iyi uygulamaları, büyük epidemiyolojik ve sistem zorluklarını gidermeye yönelik yaklaşımları ve araştırmaların desteklenmesini içeren TB Stratejisini Durdurma (Raviglione and Uplekar 2006) dur. Yenilikler (Kutu 2). 2006'da başlatılmış ve küresel hedeflere ulaşmak için kapsamlı ve bütçelenmiş bir plan olan Global Plan 2011-2015'in temelini oluşturmaktadır (Raviglione 2006b; 2007; Korenromp ve diğerleri 2012). KUTU 1. Hedefler, HEDEF ve TBC KONTROLÜ GÖSTERGELERİ Binyıl Kalkınma Hedefleri'nde Sağlık Hedef 6: HIV / Hedef 6c : Sıtma ve diğer önemli hastalıkların görülme sıklığını durdurun ve başlatın

TB ile ilişkili insidans, yaygınlık ve ölüm oranları Gösterge 6.10 : : : DOTS kapsamında tespit edilen ve tedavi edilen tBC vakalarının oranı TB Ortaklığı Hedeflerini Durdurun 2005'e kadar : Balgam yayma pozitif TB hastalarının en az% 70'inde teşhis konulacak (DOTS stratejisi altında) ve en az% 85'i başarıyla tedavi edilecektir. En az% 70'lik bir vaka tespit oranı hedefi ve en …

Devamını Oku »

PD1'in kristal yapısı, Haemophilus yüzey fibrili (Hsf) olağandışı büyük bir üçlü ototransporterdir En öldürücü soylar H tarafından eksprese edilen yapışkan (TAA). Influenzae . Hsf'nin patojen ve konukçu arasındaki yapışmaya aracılık ettiği bilinmektedir ve epiglotit, menenjit ve pnömoni gibi potansiyel olarak ölümcül hastalıkların kurulmasına izin verir. Yakın tarihli araştırmalar bu TAA'nın yeni bir 'saç tokası benzeri' bir mimari oluşturabileceğini önermekle birlikte, yüksek özünürlüklü yapısal veriler bulunmayan Hsf'nin karakterizasyonu silico modelleme ve elektron mikrograflarında ile sınırlı olmuştur. Burada, Hsf varsayımsal alan 1 (PD1) 'in kristal yapısı 3.3 Â çözünürlükte bildirilmektedir. Yapı, beklenmedik bir N-terminal TrpRing alanının mevcudiyetini açığa vurarak önceki alan açıklamasını düzeltir. PD1, çözülecek olan ilk Hsf alanını temsil eder ve böylece 'saç tokası benzeri' hipotez üzerine daha fazla araştırma yapılmasını sağlar. Anahtar Kelimeler: Hsf varsayımsal alan adı 1, trimerik ototransporter, Haemophilus influenzae adezin, hücre adhezyonu, Haemophilus yüzey fibril 1. Giriş Haemophilus influenzae üst solunum yolu enfeksiyonlarına, pnömoniye ve akut menenjit (Danovaro-Holliday ve ark. 2008 ; Murphy'ye bağlı enfeksiyonlara neden olan Gram negatif fakültatif anaerobik bir bakteridir ve diğerleri 2009 ). Farklı suşları H. Influenzae ya a-f serotiplerine, ikincisine de tipik olmayan olarak tanımlanan (Barenkamp ve St Geme, 1996 ) alt bölümlere ayrılmış şekilde kapsüllenmiş ya da kapsül içine alınmamıştır. H. Influenzae enfeksiyon, birçok pilus ve nonpilus yapışkan faktörlerin aracılık ettiği bir süreçte patojenin konak epitel hücresi astarlarına ve çeşitli ekstraselüler matriks (ECM) proteinlerine ( örneğin vitronektin) yapışmasıyla kurulur (Cotter ve diğerleri 2005 Virkola ve diğerleri 2000 ; Hallström ve diğerleri 2006 ). Yapışma, bakterinin konakçı tarafından temizlenmesini önlemesine izin verir ve sayısız virulans mekanizmaları yoluyla derin yerleşimli bir enfeksiyonun kurulmasını kolaylaştırır . Tüm suşları H. Influenzae patojeniktir, 1990'lı yıllarda etkili bir aşı kullanımına başlamadan önce hastanın morbidite ve mortalitesinin en yüksek oranlarından sorumlu olan virülan tip b (Hib) 'dir. Hib tarafından kullanılan böyle bir virülans faktörü, daha iyi karakterize edilmiş bir başka H ile önemli homoloji paylaşan bir trimerik ototransporter adhesin (TAA) proteini olan Haemophilus yüzey sarmalı (Hsf) dir. Influenzae ve diğerleri ve diğerleri 2015 (19459019). TAA'lar olarak bilinen HIA (Cotter ve ark. Salgılanan proteinlerin tip V ailesinin bir parçası olan, doğrusal bir fibril 'lollipop' yapısında düzenlenmiş üç ana alan türüne sahiptir. Baş ve küre alanları, hücre dışı bölgede N-terminüsünden serpiştirilir. YadA benzeri (YIhead) alanlar (Nummelin ve ark. 2004 gibi) ya çapraz mimarilere sahip β-tabakalardan oluşan ön alanlar ya da Triptofan halkası (TrpRing) alanları (Szczesny ve diğerleri 2008 (19459019)), tipik olarak proteinlerin yapışkan aktivitesine aracılık etmektedir. Sap, süper sargının derecesine ve yönüne (Hernandez Alvarez ve ark. 2010 ) bağlı olarak hepartan'tan pentadecad'a değişen periyodik üçlü üç boyutlu sargılı bir yapı oluşturur. Son olarak, C-terminal translokatör alanı, her bir altbirim bir amfipatik alfa-helis artı dört β-tabakaya katkıda bulunan bir trimerik β-namludur (Meng ve ark. 2008 ). Bu alan, proteinin geri kalan kısmının zar yoluyla translokasyonundan sorumludur ve tüm TAA'larda bulunur (Lehr ve diğerleri 2010 ). Son zamanlarda yapılan araştırmalar, Hsf'nin EM görüntülerine dayanan görünüşte yeni bir 'saç tokası benzeri' yapıya sahip olduğunu öne sürdü ( Singh ve diğerleri 2015 ). Paylaşılan bölgelerinde, Hia ve Hsf'nin% 72 sekans özdeşliği vardır (Hia161-1098 ve Hsf1484-2413, Ek Şekil S1), ancak tam uzunlukta trimerik Hsf (~ 750 kDa), Hia'nın (~ 340) iki katından daha büyüktür KDa). Hia'nın iki bağlayıcı alanı (HiaBD1 ve HiaBD2) de Hsf'de tanımlanmıştır (Laarmann ve diğerleri 2002 ); Bununla birlikte, Hia'nın aksine, Hsf'nin ek bir bağlanma alanı (HsfBD3) ve üç varsayımsal alanı vardır, yapısı ve fonksiyonu bilinmemektedir. Dahası, Hsf'nin alanlarını modellemeye yönelik sınırlı bir in silico yaklaşımı, ~ 200 nm'lik doğrusal bir TAA olmasının muhtemel olduğunu ortaya koymuştur (Singh ve diğerleri 2015 ). Buna rağmen, Hsf'nin elektron mikrografları H'de ifade edildi. Influenzae RM804 Hsf'yi doğrusal bir TAA olarak değil çift katlı bir saç tokası halkası yapısı olarak göstermiş görünüyor. Alan dizilişinin haritalanması, Hsf'nin N-ucunun zarın yakınında bulunması ve 'kıl tokası benzeri' hipotez ile tutarlı olmasını önerdi. Yapışkan işlevine ek olarak, Hsf'nin bağlandığı gösterildi. Kompleman inhibitörü vitronektin (Vn): etkileşim, HsfBD2 ve C-terminali Vn kalıntıları 352-374 ile eşleştirilmiştir (Hallström ve diğerleri 2006 ; Singh ve ark. 2014 ). Hem serumda hem de ECM'de bulunan bu glikoproteinin kazanılması, H'yi sağlar. Influenzae kompleman sisteminden kaçınmak ve epitelyal yüzeye daha iyi yapışmak suretiyle bakteri virülansını arttırmaktır. Bu kısmen Hia'nın aksine Hsf'nin en öldürücü, tiplendirilebilir H suşlarında ifade edildiğini açıklayabilir. Influenzae . Burada, bir Hsf varsayımsal alanının (PD1) kristal yapısını bildiriyoruz. Bu yapı, PD1, N-TrpRing: KG: TrpRing-C için yeni bir alan düzenlemesi ortaya çıkarır ve bu nedenle daha önce silico dizi analizi ile tanımlanan alan mimarisinin yerini alır. Bu çalışma, bu TAA'nın varsayımsallaştırılmış yeni 'saç tokası benzeri' yapıyı (Singh ve ark. 2015 kabul ettiği) belirlemek için Hsf'nin tam uzunluklu yapısını belirlemek için sürekli bir çaba oluşturmaktadır. 2. Gereçler ve yöntemler 2.1. Makromolekül üretimi 2.1.1. PD1-GCN4 Hsf alanı PD1, iki GCN4 bağlantı proteini arasında klonlandı. GCN4, doğal haliyle sargı bobini dimerini oluşturan iyi tanımlanmış bir maya transkripsiyon faktörüdür. Bununla birlikte, hidrofobik çekirdeğindeki spesifik kalıntıların mutajenezi GCN4'ün çeşitli oligomerik durumları benimsemesine olanak tanır. Bu nedenle, kararlı oligomerizasyonu kolaylaştırmak için füzyon proteinleri için ortak olarak GCN4 varyasyonları sıklıkla kullanılır. Bu durumda, fikir, HsfPD1'in dengeli trimerleşmesini kolaylaştırmak için hem N- hem de C-terminusuna iyi karakterize edilmiş trimer oluşturan bir GCN4 varyantı eklemek olmuştur (Hernandez Alvarez ve diğerleri 2008 (Hartmann ve diğerleri 2012 Koiwai ve diğerleri 2016 ) Lupas grubunun başarıyla kullandığı gibi. Bu füzyon proteini, PD1-GCN4, restriksiyonsuz (RF) klonlama kullanılarak üretilen bir pIBA-PD1-GCN4tri-His 6 plazmidinden eksprese edildi. PD1 geni, bir pET-16b- hsf polimeraz zincir reaksiyonu ile, 1-2414 plazmid. Primerler, hedef vektör olan pIBA-GCN4tri-His 6 (19459034) (Tamamlayıcı Tablo S1) tamamlayıcı çıkıntıları olan PD1 genini içeren bir 'megaprimer' üretmek üzere tasarlandı. 6 XhoI (New England Biolabs) ile restriksiyon sindirimi ile lineer hale getirildi ve PD1 genini (bunun içinde bulunan PIBA-GCN4tri-His 'Megaprimer') plasmid içine sokun. PD1-GCN4 ekspresyonu, 4 saat süreyle 8.6 μl M nihai konsantrasyona bir anhidrotetrasiklin hidroklorürün eklenmesiyle 0.6 OD 600 de indüklendi. Hücreler 193 K'de gece boyunca saklanan santrifüjleme (2000 g ile 10 dakika süreyle 277 K'de) ile toplanmış ve 50 m M 'den oluşan tampon [NaH 4 500 m NaCl, pH 8.0, 500 m . Hücreler sonikasyon ile parçalanmış ve süpernatanlar santrifüjleme (1600 g ile 10 dakika 277 K'de) ile toplanmıştır. Protein, immobilize metal iyon-afinite kromatografisi (IMAC) ile saflaştırıldı. PD1-GCN4 ihtiva eden temizlenen süpernatant, daha önce tampon A (2 x 6 ml; üç kolon hacmi) ile dengelenen bir Ni-NTA agaroz sütunu (GE Healthcare) üzerine tatbik edildi ve ajitasyon ile 1 saat süreyle bağlanmasına izin verildi. Proteinler, 50 m

NaH [500.04] NaCl'den oluşan tampon B ,% 10 gliserol, 300 m imidazol pH 8.0. Saflaştırılmış proteinin kalitesi, çok açılı bir lazer ışığı saçan (SEC-MALLS) aparatına (Şekil 1) bağlanan boyut uzaklaştırma kromatografisiyle değerlendirildi a ). SEC-MALLS, 50 m'lik Tris, 500 mM'lik NaCl, 50 mM Tris, 1 mM NaCl ve 1 mM NaCl'den oluşan tampon C ile dengelenmiş bir Superdex 200 5/150 …

Devamını Oku »

F-kompleksinin yapısı DNGR-1, ölme ile maruz bırakılan F-aktini bağlayan bir C-tipi lektin reseptörüdür Ve ölü hücrelere bağlı antijenlerinin dendritik hücreler tarafından çapraz sunumunu kolaylaştırır. Burada 7.7 Å çözünürlükte F-aktine bağlı DNGR-1'in yapısını sunuyoruz. Alışılmışın dışında F-aktin bağlayıcı proteinler için, DNGR-1 ligand bağlama alanı, bir protofilament boyunca iki bitişik aktin alt birimi yanında iki protofilamanın üzerine köprü alarak aktin filamanında helisel olarak düzenlenmiş üç aktin alt birimi ile temas eder. Ligand bağlanmasına aracılık ettiği tahmin edilen kalıntıların mutasyonu ölü hücre ile ilişkili antijenlerin DNGR-1'e bağlı olarak çapraz sunumunun kaybolmasına yol açtı ve resmen F-aktin tanımaya bağlı olduğunu gösterdi. Özellikle, DNGR-1, F-aktin için nispeten mütevazı bir afiniteye sahiptir, ancak çok değerli etkileşimler, bağlanma kuvvetinde belirgin bir artışa izin verir. Bulgularımız, hücresel proteinlerle aktin bağlanma modları üzerine ışık tutuyor ve adanmış reseptörler vasıtasıyla hücre iskelet bileşenlerinin hücre dışı algılanışının, hücresel bütünlüğün kaybının bağışıklıkla izlenmesine izin verdiğini ortaya koyuyor. Giriş Dokuya verilen hasar sterilliği korumak ve hasar gören bölgenin onarımını teşvik etmek için tasarlanmış bir enflamatuar yanıt ortaya çıkaran hasara-bağlı moleküler kalıpları (DAMP'ler) serbest bırakır. Omurgalılarda DAMPler, hasar gören hücrelerde bulunan yabancı antijenlere, tümörlere ve bazı virüslere karşı bağışıklık başlatmanın başlıca yolu olan adaptif bağışıklık tepkilerini ek olarak destekleyebilir (Zelenay ve Reis e Sousa, 2013). DNGR-1 (CLEC9A olarak da bilinir) ölü hücreler tarafından maruz bırakılan bir DAMP için özgül doğuştan bir bağışıklık reseptörüdür (Sancho ve ark., 2009). DNGR-1, bağışıklık tepkilerinin başlatılmasından ve düzenlenmesinden sorumlu bir lökosit alt dendiri olan dendritik hücreler (DC'ler) tarafından spesifik olarak ifade edilir (Caminschi ve diğerleri, 2008; Huysamen ve diğerleri, 2008; Poulin ve ark., 2012; Poulin ve ark. , 2010; Sancho ve ark., 2008). Ölü hücrenin tanınmasına yanıt olarak DNGR-1 sinyali, ölü hücre ile ilişkili antijenlerinin DC'ler ile çapraz sunumunu ve sitotopik virüslere karşı sitotoksik T lenfositlerin primerlenmesini kolaylaştırır (Iborra ve ark., 2012; Sancho ve ark., 2009; Zelenay ve ark. ., 2012). Yakın zamanda, biz ve diğerleri, DNGR-1 tarafından tanınan DAMP'nin, ökaryotik hücrelerin her yerde bulunan ve bol miktarda bulunan hücre içi bir bileşeni olan aktin lifli formu (Ahrens ve diğerleri, 2012; Zhang ve diğerleri, 2012) olduğunu bildirdik. F-aktin tanıma, DNGR-1'in ölü hücrelerin evrensel bir dedektörü olarak nasıl davranabileceğini açıklar ve hücre hasarının doğuştan bağışıklık tespiti aracı olarak sitoklonel pozlamayı ortaya çıkarır. DNGR-1, bir disülfid bağlı homo-dimerik C tipi lektin süper ailesinin tip II trans-membran proteini (Huysamen ve ark., 2008; Sancho ve diğerleri, 2008). Her bir DNGR-1 monomerinin hücre dışı alanı (ECD), ligand bağlama bölgesini taşıyan tek bir C-tipi lektin benzeri alan (CTLD) ve izoforma spesifik uzunlukta 48'lik bir membran-proksimal "boyun" bölgesi izlemektedir (Huysamen ve diğerleri, 2008; Sancho ve diğerleri, 2008). İnsan DNGR-1'in bağlanmamış CTLD'sinin kristal yapısı, 5 kalıntı eksik bir iç bölüm haricinde çözülmüştür (Zhang ve diğerleri, 2012). Yapısı DNGR-1'in CTLD'si C-tipi lektin süper ailesindeki diğer CTLD'lerinkine benzemektedir. Bununla birlikte, bunların hiçbirinin aktinle bağlandığı gösterilmemiştir, bu reseptör spesifıklığının, ligandı ile kompleks içindeki reseptörün yapısını çözerek moleküler düzeyde anlaşılabileceğini göstermektedir. Burada, 7.7Å çözünürlükte F-aktine bağlı DNGR-1'in yapısını belirlemek için elektron kriyomikroskopi ve sarmal görüntü analizi kullanıldı. DNGR-1 CTLD, iki aktin protofilamenti arasındaki ara yüze, polimerik ligand için reseptörün spesifikliğini açıklayan aktin bağlayıcı proteinler arasında olağandışı bir topolojiye bağlanır. F-aktin için DNGR-1 afınitesinin ılımlı olduğunu ancak bağlanma mukavemetini en az üç derece artırmak için avid ile telafi edildiğini, böylece etkili ligand tanımaya izin verdiğini daha da göstermiştir. Ek olarak, ligand bağlanmasında bozulmuş mutantları kullanarak, F-aktin tanımanın DNGR-1'in ölü hücre ile ilişkili antijenlerin çapraz sunumuna aracılık etme kabiliyetinin temelini oluşturduğunu resmen gösterdik. Verilerimiz, hücre ölümünün immün tanımasının, maruz kalmış sitokkelet bileşenlerini tespit etmek için optimize edilmiş bir CTLD'nin evrimiyle nasıl ilerleyebileceğini göstermektedir.

Sonuçlar DNGR-1, Aktin protofilamentleri arasındaki arayüz DNGR-1 ile F-aktinin tanıması için moleküler temelin anlaşılması için, aktin filamentlerine bağlı olan DNGR-1'in yapısını çözmek için yola çıktık. 293F hücrelerinde çözünebilir disülfid bağlı dimerik protein olarak DNGR-1'in (uzun izoformun; Şekil S1) tüm EÇG'sini ifade ettik (Ahrens ve diğerleri, 2012). Ardından, saflaştırılmış ECD, in vitro F-aktin'i dekore etmek için kullanıldı ve kompleksler, elektron kriyomikroskopi …

Devamını Oku »

Ventana'nın Robert Kugel ile Etkili Görüşmesi …

Kuruluşlar, büyüme gündemlerini dikkatli harcamalarla dengelerken birçok finansal lider, her iki hedefe ulaşmanın bir yolu olarak harcama yönetimine odaklanıyor. Robert Kugel Son zamanlarda Ventana Research'te kıdemli başkan yardımcısı ve araştırma direktörü olan Robert Kugel ile röportaj yaptık: Robert Kugel "width =" 150 "height =" 150 "/> , Bir iş ve teknoloji araştırma firması, etkin bir harcama yönetimi stratejisi geliştirme konusundaki …

Devamını Oku »

Tedaviyi etkili şekilde değerlendirmek …

1. Rubin DB. Karşılaştırmalı etkinlik araştırmasının sınırlamaları hakkında . Stat Med 2010; 29 : 1991-1995. [PubMed] 2. Tunis SR, Benner J, McClellan M. Karşılaştırmalı etkinlik araştırması: Politika bağlamı, yöntem geliştirme ve araştırma altyapısı . Stat Med 2010; 29 : 1963-1976. [PubMed] 3. Fung V, Brand RJ, Newhouse JP ve diğerleri. Karşılaştırmalı etkinlik araştırması için Medicare verilerini kullanma: Fırsatlar ve zorluklar …

Devamını Oku »