18 Aralık 2017,Pazartesi
Anasayfa » Tag Archives: Bölgesi

Tag Archives: Bölgesi

Roma Konaklama Rehberi | İNGİLİZCE BÖLÜMÜ Lazio Bölgesi 'nin en büyük şehri Roma Bizans İmparatorluğu, Roman İmparatorluğu, İtalya Krallığı, bir ana metropol olan Papalık Yönetimi ve İtalya Cumhuriyeti'nin başkentliğini yapmış ve hala yapmakta. Üstelik İstanbul gibi 7 tepeli bir şehir. Aventino, Campidoglio, Palatino, Quirinale, Viminale, Celio ve Esquilino Tepeleri kuruldu. Her yıl milyonlarca turisti kendine çekiyor. Tarih, arkeoloji, sanat ve gastronomi için gezginlere sonsuz seçenekler sunan Romanlar seyahatinizde nerede kalacağınız is aslında hem kolay hem de zor bir seçim. Kolaylığı, onun bütçeye uygun alternatiflerin yapılmasıyken zorluk derecesi seçenekler çok fazla olmasından dolayı akıl karıştırıcılığı. Roma Konaklama Rehberi yaz fit için uygun konaklama seçeneklerini bölgeler özelinde anlatmaya çalışacağım. Konaklama bölgeleri ve otellere geçmeden önce kısaca şehrin ulaşımında altyapısından da bahsedeyim. Roma'da şehir içi ulaşım için metro ve otobüs seçenekleri mevcut. Metro 3 hatlı ancak hatlardan birisi turkey regionelerin çok dışında. Otobüs çok daha yaygın. Günlük, 48 veya 72 saatlik biletlerle her iki seçeneği de sınırsız kullanabilirsiniz. Roma Ulaşım Rehberi yazısında bu çok daha detaylı bilgiler bulmanız mümkün. Roma binası haritası

Aslında şehrin turistik bölgeleri Centro Storico (19459007)

Devamını Oku »

Yarının akıllı bölgesi için güç ağlarını en iyi duruma getirme …

                                                                                                          Lehigh endüstriyel mühendislik Ph.D. Aday Jie Liu, bir IBM doktorasını kazandı. Dünyadaki 12 IBM araştırma laboratuvarından biri olan IBM Research-Ireland'daki güç sistemleri ve veri analizleri için Burs Ödülü. Kredi: Christa Neu / Lehigh University      Kaynak

Devamını Oku »

Savunma Bölgesi 3 Ultra HD v1.1.8 Android Hile APK indir

Yazar: Gökhan Öğütcü Kategori: Android Hileli Oyunlar, Android Strateji Oyunları 8 Mayıs 2017 76 Görüntülenme Savunma Alanı 3 Ultra HD v1.1.8 Android Para Hile MOD APK + DATA indir Heyecan dolu bir strateji oyunu bu oyunda siz düşmanlarınızla savaşa gireceksiniz. Girdiğiniz savaşlarda düşmanlarınızdan daha iyi bir performans sergileyerek kazanmaya çalışacaksınız. Bu savaşları kazanabilmek için bir strateji oluşturun. Savaş esnasında doğru …

Devamını Oku »

Dizel yasak mı? Temiz Hava Bölgesi genişlemesi, dizel araçlarının İngiltere şehirlerine girmesini talep etti

İngiltere genelinde şehirlerdeki ve şehirlerdeki dizel sürücüleri toksin vergisi veya şehir merkezlerinde dizel yasakla vurulabilirdi. Çevre Gıda ve Köy İşleri Dairesi tarafından yayınlanan bir danışma belgesi, kirleten araçlara günlük giriş ücreti ödeyebilecekleri Birleşik Krallık çevresindeki Temiz Hava Bölgelerinin genişletilmesini önerdi. İstişare belgesinde Euro 6 emisyon standardının altındaki dizel araçların, ücret alınmadığı sürece yeni Temiz Hava Bölgeleri'ne girme yasağı doğrultusunda olabileceği …

Devamını Oku »

Folluk bölgesi

                                        130 Takipçi | 0 Takip                             Kategorim                   Diğer İçeriklerim (12)                    Tüm içeriklerim                   Takipçilerim (130)                                                                                01 05 2017                                                                                                                                                          0             0             0                                                                         Kaynak

Devamını Oku »

19F-NMR, Mo'nin Rolünü ortaya çıkarır … β-laktamaz antibiyotiklerine direncin en önemli mekanizmalarından biri olan β-laktamazlar tarafından katalizlenen hidroliz. [1] Her ne kadar β-laktamazlar, Bir nükleofilik serin (sınıf A, C ve D), β-laktamlara dirençli olarak iyi bilinen roller taşımaktadır; B sınıfı Zn II'ye bağımlı metallo-β-laktamazlar (MBL'ler) daha yakın zamanda ortaya çıkmıştır Önemli bir klinik problemdir (Şekil ). A sınıfı β-laktamazların (örn klavulanik asit) klinik olarak yararlı önleyicileri yaygın olarak kullanılmaktadır ve avibactam'ın yakın zamanda geniş spektrumlu bir serin β-laktamaz inhibitörü olduğu bildirilmiştir; Bununla birlikte, MBL'ler için böyle bir inhibitör mevcut değildir.4 A) Metalo-β-laktamazlar (MBL'ler) için anahat mekanizması. B'de "açık" (PDB ID: 2FHX) 8a ve C "kapalı" (PDB ID: 4BP0) 8b konformasyonları … ] São Paulo MBL-1 (SPM-1) ilk olarak β-laktam dirençli Pseudomonas aeruginosa 5 ve SPM-1 üreten P'de tanımlandı. Aeruginosa Brezilya hastanelerinde endemiktir.6 Avrupa, Asya ve Kuzey Amerika'da SPM-1 aracılı dirençle ilgili yakın tarihli raporlar, küresel yayılımını ortaya koymaktadır.7 SPM-1, inhibisyon perspektifinden dolayı belirli bir zorluktur; Substrat özgüllüğü (penisilin, sefalosporin ve karbapenem hidrolizi katalizörü) hem B1 hem de B2 alt aileye ait MBL'lere karakteristik özelliklere sahiptir (Şekil 1, Destekleyici Bilgi). 8 SPM-1, di-Zn II iyon gereksinimi ve (mevcut kanıtlara dayalı olarak) kinetiğine göre 9 SPM-1 olağandışı ikinci küre kalıntılarına 10 sahiptir ve mobil aktif bölge bölgelerine göre B1 MBL'ler arasında benzersizdir; SPM-1, B2 MBL'lerin karakteristik özelliklerini oluşturan genişletilmiş bir "α3 bölgesi" (kalıntılar 223-241, BBL numaralandırma) ve nispeten kısa bir L3 döngüsüne (kalıntılar 61-66, BBL numaralandırma) sahiptir.8a SPM-1'in yapıları yoktur Substratlar / önleyiciler ile kompleksleşmiş halde, α3 bölgesinin aktif bölgeye göre open8a ve closed8b konformasyonlar benimsediği yapılar bildirilmiştir (Şekil B, C). İçerdiği Duyarlılık, rezonans eksikliği ve NMR cihazlarındaki ilerlemeler ve prob tasarımı, protein gözlemleme 19 F-NMR (PrOF NMR) konformasyonel değişiklikler ve protein-ligand etkileşimleri incelenirken artan bir yarar sağlar. , Verimli bir şekilde flor etiketleri (Şekil S2A) .8b, 12 tanıtmak için 3-bromo-1,1,1-trifloroaseton (BTFA) tarafından sistein alkilasyon kullanarak MBL dinamikleri incelemek için PrOF NMR kullanımı hakkında rapor Burada, biz PrOF NMR çalışmaları Göreceli imp hakkında bilgi veren SPM-1 Farklı sınıflarda MBL substratlarının / inhibitörlerinin bağlanmasında L3 döngüsü ve α3 bölgesinin ortansı. Önemlisi, MBL katalizörünün hidrolize β-amino asit ürünlerinin, L3 döngüsünü içeren bir süreçte SPM-1'e bağlanabileceğini ortaya koymaktadır. L3 döngüsünde (Y58) ve α3 bölgesindeki (F151) rezidüler 19 F ile değiştirme ve etiketleme için seçilmiştir (Şekil S2B). İlk çalışmada biz Y152; 8b'yi etiketledik, ancak daha ileri çalışmalar için F151'i seçtik, çünkü SPM-1 kristal yapılarının analizi8 F151 yan zincirinin hareketli olduğunu ve Tyr152'ninkinden daha aktif alan çinko iyonlarına yakın projeleri ima ettiğini gösterir (Şekil S3 ). BTFA (sırasıyla Y58C * ve F151C *) kullanılarak Y58C ve F151C SPM-1 varyantlarının selektif etiketlenmesi intakt protein ve tripsin-digest kütle spektrometrisi ile doğrulanmıştır (Şekil S4-11). Dikkat çekici olarak, SPM-1'deki doğal olarak var olan sistein (Cys221), BTF ile reaksiyon göstermedi, muhtemelen Cys221'in karbamidometilasyonu ile kanıtlandığı üzere Zn II'yi kenetlediği için Y58C * ve F151C * 'nin MS analizlerinde Cys58 ve Cys151 değil (Şekiller S8-11). Yabani tip (wt) SPM-1, Y58C * ve F151C * 'nin dairesel dikroizm spektrumları13 benzerdi (Şekil S12), dolayısıyla Y58C'nin kristalografik analizleri ile desteklenen benzer toplam kıvrımları ima eder (Şekil S13,14 ve Tablo S1). Kinetik analizler14 (Şekil S15), CH 3 COCF 3 etiketinin eklenmesinin substrat afinitesini büyük ölçüde değiştirmediğini, yani benzer wt SPM-1 ve her ikisi de etiketli varyant ile meropen için M değerleri elde edildi. k 'nin 2.5 kat azalması, Her iki SPM-1 * varyantı ile meropenem için kedi muhtemelen enzim-ara komplekslerinde modifiye edilmiş kalıntıyı içeren etkileşimleri yansıtmaktadır. Kombine biyofiziksel ve kinetik çalışmalar, Y58C * ve F151C * 'nin özelliklerinin, PrOF NMR çalışmalarını haklı çıkarmak için ağırlıkça SPM-1'e yeterince benzediğini ortaya koymuştur. BTFA'nın protein alkilasyonuyla ilgili önceki çalışmalarla birlikte bu sonuçlar, BTFA'nın, translasyon sonrası sistein alkilasyonu yoluyla 19 F etiketlerinin etkili bir şekilde verilmesi için kullanışlı olduğunu ortaya koymaktadır. 19 F-NMR spektrumları, -83.15 ppm'de (Y58C *) ve -84.75 ppm'de (F151C *; Şekil S16) ana protein gözlem tepeleri ortaya çıkardı ve böylece varyantların işaretlenmiş halkaları / bölgeleri ağırlıklı olarak tek bir konformasyonda mevcut olduğunu gösterdi Veya daha muhtemel olarak, etiketli kalıntıların NMR kaydırma zaman ölçeğine göre hızla ilerlediğini görürsünüz. F151C * varyantı, muhtemelen konformasyonel hareketi yansıtan -84.75 ppm'de daha keskin zirvelerin her iki tarafında da geniş sinyaller verdi; Bununla birlikte, değişken sıcaklık çalışmalarında (277 K – 310 K) sinyalin çizgi genişliğinde ve yoğunluğunda değişiklikler gözlemedik. Kristalografik kanıtlarla uyumlu olarak, solvent izotop değişim çalışmaları (Şekil S17) maruz kalan α3 bölgesinde bulunan F151C * 'nin, daha az maruz kalan L3 döngüsünde bulunan Y58C *' ye daha kolay çözülebilir olduğunu ortaya koymuştur. Daha sonra temsili MBL ligandlarının Y58C * ve F151C * SPM-1'e bağlanmasını araştırmak için PrOF NMR (Şekil S18) kullandık (Tablo S2, K için Tablo S3'e bakınız) D değerleri). Başlangıçta, ligand bağlanmasını araştırmak için SPM-1 * varyantlarının kullanımını doğrulamak için rapor edilen MBL inhibitörlerini test ettik. Çinko kenetleme maddesi 1,10- o -fenantrolin ile hem Y58C * (Şekil A) hem de F151C * (Şekil 19459005) B) için yeni NMR tepeleri gözlemlendi. Bu zirveler, çözeltide 1,10- ile tahmin edilen Zn II ekstraksiyonuyla tutarlı olan apo -SPM-1 * spektrumunda gözlemlenenlerle aynıdır. -fenantrolin; 1,10- o -fenantrolinin kendisinin apo [Madde -Y58C * (Şekil 19459005) A ve Şekiller S19,20'ye bağlandığı gözlemlenmemiştir. Bu sonuçlar, metalo-enzim inhibisyon çalışmaları yoluyla her zaman kolayca erişilemeyen çözelti ve / veya protein içindeki metal şelasyon / bağlanmanın tespit edilmesinde PrOF NMR'nin faydasını ortaya koymaktadır. Rodanin ML302 ve tioenol ML302F ile, sırasıyla, Y58C * ve-F151C * için -83.75 ppm ve -84.40 ppm'de 16 yeni zirve gözlendi (Şekil S21). Bu gözlemler, kuluçka koşulları altında tioenol ML302F'yi vermek üzere ML302'nin hidrolizi ile tutarlıdır.17 -1 MBH'leri inhibe eden, ancak SPM-1'i (IC505) inhibe eden -Captopril,> 500 μ m 18 ve alt sınıf B2 MBL'leri 19, önemli değil SPM-1 * varyantlarının herhangi biri için 19 F spektrumundaki değişiklikler (Şekil S22). SPM-1 * 'e bağlanan inhibitörün PrOF NMR monitörizasyonu. 19 1,10- -fenantrolinin A) Y58C * SPM-1 ve B) F151C * SPM-1 ile etkileşimlerinin F-NMR spektrumları. 19 … 'nin F-NMR spektrumu. İzokinoller, geniş spektrumlu MBL inhibitörleri, 13,14, ancak bağlayıcılarıdır Modu bilinmiyor. İzokinolin ( 1 ) 13, 14'ün Y58C * ile titre edildiğinde, ara değişimde bir sistemin tipik olan önemli çizgi genişlemesi gözlemlendi. ML302F17'nin Y58C * ve 1'i içeren bir numuneye eklenmesi, ML302F'ye bağlı kompleksin zirve karakteristik özelliğinin ortaya çıkmasına ve Y58C * zirvesine göre 1.1 ppm ile deshield edilen yeni bir zirvesinin ortaya çıkmasına yol açtı (Şekil C). F151C * ile, 1 genişleme ve kimyasal kayma değişiklikleri indükledi (Şekil D). Böylece, 1 'nın bağlanması hem α3 hem de L3 bölgelerini etkiler (Şekil S22-24). Bununla birlikte, ilginç bir şekilde sonuçlar, 1'in aktif saha çinko iyonlarına bağlandığı bilinen ML302F'nin varlığında SPM-1'e bağlandığını ima etmektedir.17 Bu gözlem ile birlikte ]Çizginin genişlemesi ile (Şekil 19459005) gösterildiği gibi apo -Y58C * 'ya bağlanır; sonuçlar, SPM-1'e benzeri görülmemiş şekilde bağlanıp eklenmediğini ima eder Sonra, sınıf A, C'yi ve bazı Dp-laktamazları inhibe eden avibactam ile örneklenen zayıf SPM-1 inhibitörlerinin bağlanmasını izlemek için PrOF NMR'nin yararını test ettik, 3b, 4c'ye sahip ancak çoğu MBL için afinitesi düşüktür.4b Avibactam ve Y58C * ile açık bir kimyasal kayma değişikliği gözlemlendi, bu nedenle avibactam bağlanmasının L3 bölgesinde ancak α3 bölgesindeki değişiklikleri indüklediğini gösterdi (Şekil S25, 26). Y58C * ile muhtemelen orijinal protein zirvesine geri dönüş, muhtemelen SPM-1.4b ile katalize edilen avıbactamın yavaş hidrolizinin bir sonucu olarak gözlendi Reaksiyona giren solüsyona yeni avibactam ilavesi, tepeyi orijinal olarak avibactam'dan doğana doğru kaydırdı Sonra, β-laktam substratlarının [a carbapenem (meropenem), a penicillin (piperacillin), and mechanism‐based inhibitors of class A β‐lactamases (tazobactam and clavulanic acid)] SPM-1 * varyantlarına eklenmesini araştırdık. Onların SPM-1 * 'e ilavesi, Y58C * için çizgi genişletme ve kimyasal değişim değişikliklerine neden olurken, F151C * (Şekil) için 825 meropenem muamelesi (400 μ m ) (saptama limitleri dahilinde değil) * Y58C * 40 μ m ), 0,2 ppm 19 F kaydırmasına (-83.15 ppm'den -82.95 ppm'ye) yol açtı ve böylece hızlı değişim (Şekil 19459005) A, E gösterildi. Zaman-kurs analizi 12 saat boyunca kararlı olan spektrumları ortaya çıkarmıştır (Şekil 19459005). Bu durumda yeni zirveye muhtemelen bir enzim ürünü kompleksini yansıttığını düşündürmektedir (Şekil S27-31). Piperacillin (400 μ m ) ile 0.4 ppm'lik bir kayma da gözlenmiştir (Şekil B, F). Bununla birlikte, meropenem'in aksine, zaman-gidiş analizi, ilave çizgi genişlemesi ve -82.75 ppm'den -82.57 ppm'e (Şekil D ve Şekil S32) ürün karmaşık zirvesine göre 0.18 ppm'lik bir başka kimyasal kayma ortaya koymuştur; bu nedenle, Yeni bir SPM-1 bağlanma türünün üretilmesi. PrOF NMR ile analiz edildiği gibi (hidrolize edilmiş) β-laktamların SPM-1 * varyantlarıyla olan etkileşimleri. A) meropenem ve B) piperasilinin Y58C * SPM-1 ile titrasyonu, L3 bölgesi ile etkileşimleri ortaya koymaktadır. Önceki çalışma, piperacillin hidroliz ürününün penisilin-bağlayıcı proteinlere, "epimerize" protein ile bağlanabileceğini ortaya koydu. Başlangıçta oluşan (5 (19459020)] – penisiloik asite (PA) tercih edilene göre ürün bağlanmasıdır. Böylece, 1 'yı kullandık.' H NMR'den Piperasilinin zaman bağımlı SPM-1 ile katalize edilen hidrolizini değerlendirir (Şekil S33). Sonuçlar SPM-1'in piperasilin hidrolizini katalize ederek muhtemelen bir enzim haricinde (5 – ) – PA verecek şekilde nispeten yavaş epimerize olan (5 ) – PA'yi vermesi için katalizlendiğini ortaya koymaktadır Katalizli yol. (5 (19459019) S ) -PA ve SPM-1'e bağlanmayı araştırmak için, Bacillus cereus [BcIIMBL14PADahasonrasaflaştırılmıştırSonuçtakiY58C*karışımınailaveedilenpiperasilinzamanperiyodunda12saatsonragözlemlendiğigibi-8257ppm'debirzirveyeyolaçan(PA52C*'ye)(Şekil) 1 H ve su LOGSY analizleri, her ikisinin de (5 (19459020) PA ve (5A) SPM-1'e bağlanmasını ortaya çıkarmıştır (Şekil S34). 19 Hidrolize piperacillin ile etkileşen Y58C * SPM-1'in F-NMR spektrumları. Piperasilin ve hidrolize ürünlerin yapıları [5(19459019)R) – PA ve 5 (19459020] – PA] yapıları gösterilmektedir. Deney karışımları: 40 μ m Y58C * SPM-1

Daha sonra PrOF NMR'yi, SPM-1 substratları olan A sınıfı SBL inhibitörleri klavulanik asit ve tazobaktam ile SPM-1.89 Hat büyütme ve -83.15'den -83.02 ve -82.98 ppm'e geçiş, 19 F Y58C'de Sırasıyla tazobaktam ve klavulanik asit tayfları; 12 saat sonra başka hiçbir önemli değişiklik görülmedi. F151C * için böyle bir etki görülmedi (Şekil S35-39). Klavulanik asit ve tazobaktamın kompleks parçalanmaya uğradığı eğilimi21 …

Devamını Oku »

Bağlanma bölgesi yoğunluğu, paralog spesifik aktiviteyi mümkün kılar …

Özet SLM2 ve Sam68, çoğunlukla fonksiyonda çakışan splicing düzenleyici paraloglarını üretirken sadece SLM2 ve Değil Sam68 beyin fonksiyonu için önemli olan Neurexin2 AS4 ekzonunu kontrol eder. Burada, SLM2 ve Sam68'in fare korteksinde ve in vitro hem de Neurexin2 pre-mRNA'ya benzer şekilde bağlandığını bulduk. Protein alan takas deneyleri, SLAR2 hedefi seçiminde SLM2 ve Sam68 aktivitesini ayıran STAR alanını içeren bir bölgeyi …

Devamını Oku »

Gri sincaplar, İngiliz kırsal bölgesi için kötü

                                               Öyleyse, bu komplo, İngiliz yasal hükümlerine ve AB yönetmeliklerine ve gri sincapın kontrol edilmesi için bir istilacı olarak listelenmesine neden olmalı, değil mi? Eh, hayır – bu argümanı teste koyun ve gerçeklerin gerçekte gri sincapa karşı yığılıp kalmadığını göreceksiniz. Gerçek şu ki, gri sincap, Kuzey Amerika orman ekosistemlerinin önemli bir parçası iken, 1876'da Viktorya tarafından Avrupa'ya getirildiğinden beri …

Devamını Oku »

F-kompleksinin yapısı DNGR-1, ölme ile maruz bırakılan F-aktini bağlayan bir C-tipi lektin reseptörüdür Ve ölü hücrelere bağlı antijenlerinin dendritik hücreler tarafından çapraz sunumunu kolaylaştırır. Burada 7.7 Å çözünürlükte F-aktine bağlı DNGR-1'in yapısını sunuyoruz. Alışılmışın dışında F-aktin bağlayıcı proteinler için, DNGR-1 ligand bağlama alanı, bir protofilament boyunca iki bitişik aktin alt birimi yanında iki protofilamanın üzerine köprü alarak aktin filamanında helisel olarak düzenlenmiş üç aktin alt birimi ile temas eder. Ligand bağlanmasına aracılık ettiği tahmin edilen kalıntıların mutasyonu ölü hücre ile ilişkili antijenlerin DNGR-1'e bağlı olarak çapraz sunumunun kaybolmasına yol açtı ve resmen F-aktin tanımaya bağlı olduğunu gösterdi. Özellikle, DNGR-1, F-aktin için nispeten mütevazı bir afiniteye sahiptir, ancak çok değerli etkileşimler, bağlanma kuvvetinde belirgin bir artışa izin verir. Bulgularımız, hücresel proteinlerle aktin bağlanma modları üzerine ışık tutuyor ve adanmış reseptörler vasıtasıyla hücre iskelet bileşenlerinin hücre dışı algılanışının, hücresel bütünlüğün kaybının bağışıklıkla izlenmesine izin verdiğini ortaya koyuyor. Giriş Dokuya verilen hasar sterilliği korumak ve hasar gören bölgenin onarımını teşvik etmek için tasarlanmış bir enflamatuar yanıt ortaya çıkaran hasara-bağlı moleküler kalıpları (DAMP'ler) serbest bırakır. Omurgalılarda DAMPler, hasar gören hücrelerde bulunan yabancı antijenlere, tümörlere ve bazı virüslere karşı bağışıklık başlatmanın başlıca yolu olan adaptif bağışıklık tepkilerini ek olarak destekleyebilir (Zelenay ve Reis e Sousa, 2013). DNGR-1 (CLEC9A olarak da bilinir) ölü hücreler tarafından maruz bırakılan bir DAMP için özgül doğuştan bir bağışıklık reseptörüdür (Sancho ve ark., 2009). DNGR-1, bağışıklık tepkilerinin başlatılmasından ve düzenlenmesinden sorumlu bir lökosit alt dendiri olan dendritik hücreler (DC'ler) tarafından spesifik olarak ifade edilir (Caminschi ve diğerleri, 2008; Huysamen ve diğerleri, 2008; Poulin ve ark., 2012; Poulin ve ark. , 2010; Sancho ve ark., 2008). Ölü hücrenin tanınmasına yanıt olarak DNGR-1 sinyali, ölü hücre ile ilişkili antijenlerinin DC'ler ile çapraz sunumunu ve sitotopik virüslere karşı sitotoksik T lenfositlerin primerlenmesini kolaylaştırır (Iborra ve ark., 2012; Sancho ve ark., 2009; Zelenay ve ark. ., 2012). Yakın zamanda, biz ve diğerleri, DNGR-1 tarafından tanınan DAMP'nin, ökaryotik hücrelerin her yerde bulunan ve bol miktarda bulunan hücre içi bir bileşeni olan aktin lifli formu (Ahrens ve diğerleri, 2012; Zhang ve diğerleri, 2012) olduğunu bildirdik. F-aktin tanıma, DNGR-1'in ölü hücrelerin evrensel bir dedektörü olarak nasıl davranabileceğini açıklar ve hücre hasarının doğuştan bağışıklık tespiti aracı olarak sitoklonel pozlamayı ortaya çıkarır. DNGR-1, bir disülfid bağlı homo-dimerik C tipi lektin süper ailesinin tip II trans-membran proteini (Huysamen ve ark., 2008; Sancho ve diğerleri, 2008). Her bir DNGR-1 monomerinin hücre dışı alanı (ECD), ligand bağlama bölgesini taşıyan tek bir C-tipi lektin benzeri alan (CTLD) ve izoforma spesifik uzunlukta 48'lik bir membran-proksimal "boyun" bölgesi izlemektedir (Huysamen ve diğerleri, 2008; Sancho ve diğerleri, 2008). İnsan DNGR-1'in bağlanmamış CTLD'sinin kristal yapısı, 5 kalıntı eksik bir iç bölüm haricinde çözülmüştür (Zhang ve diğerleri, 2012). Yapısı DNGR-1'in CTLD'si C-tipi lektin süper ailesindeki diğer CTLD'lerinkine benzemektedir. Bununla birlikte, bunların hiçbirinin aktinle bağlandığı gösterilmemiştir, bu reseptör spesifıklığının, ligandı ile kompleks içindeki reseptörün yapısını çözerek moleküler düzeyde anlaşılabileceğini göstermektedir. Burada, 7.7Å çözünürlükte F-aktine bağlı DNGR-1'in yapısını belirlemek için elektron kriyomikroskopi ve sarmal görüntü analizi kullanıldı. DNGR-1 CTLD, iki aktin protofilamenti arasındaki ara yüze, polimerik ligand için reseptörün spesifikliğini açıklayan aktin bağlayıcı proteinler arasında olağandışı bir topolojiye bağlanır. F-aktin için DNGR-1 afınitesinin ılımlı olduğunu ancak bağlanma mukavemetini en az üç derece artırmak için avid ile telafi edildiğini, böylece etkili ligand tanımaya izin verdiğini daha da göstermiştir. Ek olarak, ligand bağlanmasında bozulmuş mutantları kullanarak, F-aktin tanımanın DNGR-1'in ölü hücre ile ilişkili antijenlerin çapraz sunumuna aracılık etme kabiliyetinin temelini oluşturduğunu resmen gösterdik. Verilerimiz, hücre ölümünün immün tanımasının, maruz kalmış sitokkelet bileşenlerini tespit etmek için optimize edilmiş bir CTLD'nin evrimiyle nasıl ilerleyebileceğini göstermektedir.

Sonuçlar DNGR-1, Aktin protofilamentleri arasındaki arayüz DNGR-1 ile F-aktinin tanıması için moleküler temelin anlaşılması için, aktin filamentlerine bağlı olan DNGR-1'in yapısını çözmek için yola çıktık. 293F hücrelerinde çözünebilir disülfid bağlı dimerik protein olarak DNGR-1'in (uzun izoformun; Şekil S1) tüm EÇG'sini ifade ettik (Ahrens ve diğerleri, 2012). Ardından, saflaştırılmış ECD, in vitro F-aktin'i dekore etmek için kullanıldı ve kompleksler, elektron kriyomikroskopi …

Devamını Oku »